腫瘍治療のためのモノクローナル抗体

专利摘要:
本発明は腫瘍成長を阻害して、腫瘍を有する対象の生存性を増加させて、哺乳類における腫瘍再発からの予防を誘導する方法に関する。この方法は、少なくとも一つの化学療法剤と組み合わせて、ｍＢＡＴ−１で表したマウスのモノクローナル抗体から誘導されるＣＤＲ領域を含むヒト化モノクローナル抗体の投与を含む。
公开号:JP2011512332A
申请号:JP2010545610
申请日:2009-02-11
公开日:2011-04-21
发明作者:ロディオノヴ ガリナ；ロテム；エフダー リナット
申请人:キュアー テック リミテッド；
IPC主号:A61K39-395

专利说明:

[0001] 本発明は、腫瘍成長を阻害して、腫瘍を有する対象の生存を増加して、哺乳類の腫瘍再発に対する予防を誘導する方法に関するものである。この方法は、少なくとも一つの化学療法剤と組み合わせて、ｍＢＡＴ−１と表わされるマウスのモノクローナル抗体から誘導されるＣＤＲ領域を含むヒト化モノクローナル抗体を投与することを含む。]
背景技術

[0002] 免疫調節の分子および細胞基部、特にＴ細胞反応のレベルについて近年における知識の急速な増加は、腫瘍ワクチンの開発を含む免疫療法の方法の新規な集積を提供する。一定のモノクローナル抗体は、Ｔ細胞の表面上の関与因子を結合する能力を含む免疫調節性活性を有することおよび、これらの細胞の増殖、活性化、成熟または分化を誘導することを示した。]
[0003] ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１またはＢＡＴ−１とも称する）はバーキット−リンパ種細胞系（Daudi）の膜標品に対して発生するマウスのモノクローナル抗体であり、それは、様々な種類の腫瘍に対して抗腫瘍および免疫賦活性の効果を呈することを示した（Hardy et al., 2001, Int. J. Oncol. 19:897）。このモノクローナル抗体は、まず最初にHardy等に米国特許第５，８９７，８６２号で開示された。ＢＡＴ−１は、CNCM Accession No.1-1397を有するハイブリドーマ細胞線によって分泌される。]
[0004] マウスＢＡＴのポリヌクレオチドおよびアミノ酸配列は、Hardy等に、国際公開００／５８３６３号および米国特許２００３／００２６８００号で開示される。マウスＢＡＴに基づく多くのヒト化モノクローナル抗体は、米国特許２００８／００２５９８０号で開示される。それらの開示によれば、ヒト化モノクローナルＢＡＴ抗体は、親マウスのＢＡＴ抗体によって誘導されるものより大きな抗癌効果を誘導するようである。試験される様々なモデル系の中で、ＢＡＴ抗腫瘍活性は、ＳＣＩＤ（重症複合免疫不全症）マウス、ＮＫ細胞が不足しているベージュマウスおよび、Ｔ細胞が不足しているヌードマウスにおいて研究された(Hardy, B., 1997, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:5756)。全てのマウスは、肺の腫瘍を後に発病するマウスＢ１６黒色腫を、静脈内に注射された。ＢＡＴは、マウスまたはヒトのリンパ球のいずれかを移植されたＳＣＩＤマウスのみが抗癌効果を及ぼした。無胸腺ヌードマウスおよびベージュマウスにおいて、この活性が野生型マウスのＢＡＴの抗腫瘍活性と比較して効果が少なかったにもかかわらず、ＢＡＴは抗腫瘍活性を及ぼした。]
[0005] マウスＢＡＴの免疫調節性効果は、生体外でさらに研究された。マウスＢＡＴは、ＣＤ４＋Ｔ細胞を活性化して、これらの細胞からＩＦＮ−γの分泌を誘導する(Hardy et al., 2000, Int. Immunol. 12:1623 and Quaglino E. et al., 2005, Vaccine 9:23(25): 3280-7, respectively)。さらに、ＢＡＴがＴ細胞の増殖を誘導してそれらの細胞溶解反応を増加させることを見出した(Hardy, B. et al., 1997, Hum. Antibodies, 8:95)。]
[0006] Ｂｅｒｇｅｒ等（２００８）は、ヒト化モノクローナル抗体ＣＴ−０１１の投与を開示して、それは進行した血液学的な悪性病変を伴う患者に対してｍＢＡＴ−１に基づき、薬物動態学と関連したものである(Berger et al. Clin. Cancer Res. 2008;14(10) May l5, 2008)。]
[0007] それは、ＢＡＴ抗体が、有益な方法で免疫反応を調整するために、腫瘍細胞それ自身ではなくむしろ、対象または患者の免疫機能する細胞を対象とすることが予想されないことを覚えておくべきである。]
[0008] 癌の治療上の処理で最も広く用いられているうちの１つは、化学療法である。化学療法剤は、癌細胞内の特定の化学物質でのそれらの効果、薬が妨げる細胞活性もしくは工程、または薬が影響を及ぼす細胞周期の特定相に基づいて、いくつかの群に分けられる。化学療法群は、アルキル化剤、ニトロソ尿素化合物、代謝拮抗剤、アントラサイクリン系、トポイソメラーゼＩおよびＩＩ阻害剤、有糸分裂阻害剤およびステロイド阻害剤がある。]
[0009] 化学療法薬が、唯一の治療法として提供することができるが、一つ以上の他の活性薬剤と組み合わせて使用されることが多い。いくつかの場合では、特定の組合せは、非常に良好な臨床成績を提供するのに適していた。例えば、代謝拮抗剤のフルオロウラシル（５ＦＵ）およびアルキル化剤オキサリプラチンが、結直腸癌の治療のための組合せの処方計画で、共に用いられる。フルオロウラシル、ロイコボリン（フォリン酸）およびオキサリプラチンの複合治療は、また結直腸癌の治療に適応され、ＦＯＬＦＯＸとして省略された。シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾン(predinisone)（ＣＨＯＰと略記）の複合治療は、非ホジキンリンパ腫の治療で使用され、ＣＨＯＰおよびキメラモノクローナル抗体リツキシマブ（Ｒ−ＣＨＯＰと略記）の組合せは、び慢性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫および他の侵略的なＢ細胞非ホジキンリンパ腫の治療で用いられる。]
[0010] 放射およびモノクローナル抗体と、ウラシル、５ＦＵまたはウラシルマスタードの複合治療は、特にＶＥＧＦレセプタの細胞外領域に結合し、米国特許第６，８１１，７７９号で開示される。この併用療法は、脈管形成を阻害することを目的とする。米国特許第６，２１７，８６６号は、ヒト腫瘍細胞を有するヒト癌患者に、抗腫瘍薬の有効量およびモノクローナル抗体の有効量を投与することを含むヒトＥＧＦレセプタを発現するヒト腫瘍細胞の成長を阻害する方法において、（ｉ）前記抗体は、前記腫瘍細胞のヒトＥＧＦレセプタの細胞外領域に結合し；（ｉｉ）抗体が抗腫瘍薬に接合せず；（ｉｉｉ）抗体がＥＧＦレセプタにＥＧＦの結合を阻害する方法である。]
発明が解決しようとする課題

[0011] 背景技術のいずれにも、それは化学療法と組み合わせるヒト化ｍＢＡＴ−１モノクローナル抗体の使用が有利であることを教示または示唆していない。実際には、ＢＡＴおよびそれに基づく抗体は免疫促進(immunomostimulatory)特性を有することが知られていたので、細胞毒性または増殖性細胞集団を破壊することによって作用する他の化学療法薬と組み合わせるこのような抗体は、それ単独で、各々の種類の薬剤より大きな臨床的な有効性を達成するために用いることができることは、非常に驚くべきであり予想外である。]
課題を解決するための手段

[0012] 本発明は、腫瘍成長を阻害して、腫瘍体積を減少させて、対象の生存性を増加させて、および、固形および非固形の腫瘍を負う対象の腫瘍再発からの予防を誘導する方法を提供する。この方法は、マウスのモノクローナル抗体ＢＡＴ−１（ｍＢＡＴ−１）の少なくとも一つの相補性決定領域（ＣＤＲ）および、受容体のヒト免疫グロブリンから誘導されるフレームワーク領域（ＦＲ）を有するヒト化モノクローナル抗体の使用を含む。このような抗体の例は、ｈＢＡＴ−１である（本願明細書で、ＣＴ−０１１とも称する）。好ましくは、本願明細書に開示したいくつかの方法は、少なくとも一つの化学療法剤を有する組合せ療法でのヒト化モノクローナル抗体の使用を含む、一方、本願明細書に開示した他の方法はそれ自身にヒト化モノクローナル抗体の使用に関するが、一つ以上の化学療法剤と組み合わせて任意選択で使用することができる。]
[0013] 本発明の原理を、リンパ球培養組織および動物の腫瘍モデル内のｍＢＡＴ−１およびＣＴ−０１１ならびに、様々な形態の血液学的な腫瘍を有するヒト患者のＣＴ−０１１の両方を使用して、本願明細書で説明する。]
[0014] 本発明は、一つには、様々な化学療法剤での治療療法に対するＣＴ−０１１の取込みが、いくつかの有益な抗腫瘍および抗癌効果、例えばいずれかの治療のみによる単一療法と比較して、腫瘍成長率の減少、腫瘍成長の阻害および生存時間の増加を含む結果となるという予想外の発見に基づくものである。さらに、化学療法処方へのＣＴ−０１１のようなヒト化抗体の取込みが、化学療法剤の用量制限毒性（ＤＬＴ）濃度に対して増加する許容度の更なる利点を提供することができることを見出した。]
[0015] 本発明はまた、一つには、対象抗体を伴う動物モデルで誘導された腫瘍の治療は、単独または化学療法剤のいずれかで、「治療」と、同じ腫瘍細胞で次の要求である腫瘍再発に対する長期保護のための記憶効果との両方を生じる観測に基づくものである。したがってヒト化抗体ＣＴ−０１１による治療によって回復する動物は、腫瘍に再発または再暴露に抵抗するようになった。さらにまた、一定の例において、ＣＴ−０１１で初期臨床試験を受けるヒト被験者はまた、この抗体一回量の投与および血液からその除去後、長期腫瘍コントロールおよび予防の効果を論証することを開示する。]
[0016] いかなる理論または作用機構に束縛されることなく、腫瘍再発または再起を防ぐ際のヒト化ＢＡＴモノクローナル抗体の活性は、本願明細書に開示して抗体ＣＴ−０１１によって例証されるように、アポトーシスから作用因子／記憶Ｔ細胞を予防する際にこのような抗体の活性を伴うことができる。]
[0017] したがって、様々な態様で、本発明は、累積的または付加的な効果を及ぼすことがこれまで知られていない抗腫瘍因子の組合せを提供する。]
[0018] 本発明の一定の原則によって、組合せが少なくとも一種の化学療法剤の投与である１つの治療、およびｍＢＡＴ−１に基づいて免疫賦活性のヒト化モノクローナル抗体の投与である他の異なる治療を含む。予想外に、２つの治療は、それ自身を別々または単独で使用するときより、組み合わせて使用するときに大きな有益な抗癌効果を達成する。本願明細書および請求項で使われるような複合治療は、多くの異なる組合せ治療のいずれか、例えば２つ以上の治療の投与の実質的に重なり合っている期間；２つ以上の治療の同時、経時的、連続的な投与または時間周期を交互にして２つ以上の治療の計画的投与を含み参照することができる。]
[0019] 第１の態様によれば、本発明は腫瘍を治療する方法において、その方法は（ｉ）それを必要とする対象にヒト化モノクローナル抗体またはその断片の有効量を投与する工程であって、抗体またはその断片は、受容体ヒト免疫グロブリンまたはその修飾物から、少なくともマウスのモノクローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）およびフレームワーク領域（ＦＲ）の少なくとも一つの相補性決定領域を有するものを投与する工程と、（ｉｉ）対象に少なくとも一つの化学療法剤の有効量を投与する工程を含み；このことにより、腫瘍を治療する。]
[0020] 他に態様によれば、本発明は更に、少なくとも一つの化学療法剤に対する許容度を改善する方法を提供し、この方法は、それを必要とする対象に、ヒト化モノクローナル抗体またはその断片の有効量を投与することを含み、抗体またはその断片は、受容体ヒト免疫グロブリンまたはその修飾物から、マウスのモノクローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）およびフレームワーク領域（ＦＲ）の少なくとも一つの相補性決定領域を有し；対象は、少なくとも一つの化学療法剤による化学療法を受けていて；それによって、前記化学療法剤に対する許容度を改善する。]
[0021] 本発明の更に別の態様によれば、腫瘍を有している対象における生存性の向上または疾患進行を阻害する方法を提供し、対象は、少なくとも一つの化学療法剤で治療され、その方法はヒト化モノクローナル抗体またはその断片の有効量を投与することを含み、抗体または断片単独は、受容体ヒト免疫グロブリンまたはその修飾物から、マウスのモノクローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）およびフレームワーク領域（ＦＲ）の少なくとも一つの相補性決定領域を有し；それによって、対象の生存性を向上させる。]
[0022] さらにもう一つの態様によれば、本発明は、腫瘍再発を減少または予防する方法を提供し、この方法は、それを必要とする対象に、ヒト化モノクローナル抗体の有効量またはその断片を投与することを含み、抗体またはその断片は、受容体ヒト免疫グロブリンまたはそれから修飾物から、マウスのモノクローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）およびフレームワーク領域（ＦＲ）の少なくとも一つの相補性決定領域を有し；それによって、腫瘍再発を減少または予防する。]
[0023] 一の実施態様によれば、腫瘍再発を減少または予防する方法は、対象に少なくとも一つの化学療法剤を投与することを更に含む。]
[0024] 特定の実施態様によれば、対象は、少なくとも一つの化学療法剤による化学療法の過程を受けているかまたは完了した。]
[0025] 様々な実施態様によれば、ヒト化モノクローナル抗体の軽鎖可変領域は、下記式によって特徴づけられる：
ＦＲＬ１−ＣＤＲＬ１−ＦＲＬ２−ＣＤＲＬ２−ＦＲＬ３−ＣＤＲＬ３−ＦＲＬ４
ここで、各々のＦＲは独立のヒト抗体のフレームワーク領域であり、各々のＣＤＲは独立のモノクローナルのｍＢＡＴ−１抗体の相補性決定領域である。]
[0026] 様々な実施態様によれば、ヒト化モノクローナル抗体の重鎖可変領域は、下記式によって特徴づけられる：
ＦＲＨ１−ＣＤＲＨ１−ＦＲＨ２−ＣＤＲＨ２−ＦＲＨ３−ＣＤＲＨ３−ＦＲＨ４
各々のＦＲは独立のヒト抗体のフレームワーク領域であり、各々のＣＤＲは独立のモノクローナルのｍＢＡＴ−１抗体の相補性決定領域である。]
[0027] 様々な実施態様によれば、ＦＲは、ヒトＴＥＬ９抗体（配列番号：１３０）の軽鎖可変領域またはその修飾物から誘導される。]
[0028] 様々な実施態様によれば、ヒトＴＥＬ９抗体の軽鎖可変領域から誘導または修飾されるＦＲアミノ酸配列は、下記からなる群から選択される：ＦＲＬ１，［ＥＩＶＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴ ＩＴＣ；配列番号：１］；ＦＲＬ２，［Ｗ（Ｆ ｏｒ Ｙ）ＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬ（Ｗ ｏｒ Ｌ）ＩＹ；配列番号：２］；ＦＲＬ３，［ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧ ＳＧＴ（Ｄ ｏｒ Ｓ）（Ｙ ｏｒ Ｆ）（Ｃ ｏｒ Ｔ）ＬＴＩＮＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹ Ｃ；配列番号：３］；およびＦＲＬ４，［ＦＧＧＧＴ ＫＬＥＩＫ； 配列番号：４］。]
[0029] 様々な実施態様によれば、ＦＲは、ヒトｈｓｉｇｈｖ１２９５抗体（配列番号：１４６）の重鎖可変領域またはその修飾物から誘導される。]
[0030] 様々な実施態様によれば、ヒトｈｓｉｇｈｖ１２９５抗体の重鎖可変領域から誘導または修飾されるＦＲアミノ酸配列は、下記からなる群から選択される：ＦＲＨ１，［Ｑ（Ｉ ｏｒ Ｖ）ＱＬＶ ＱＳＧＳＥ ＬＫＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳ ＧＹ（Ｔ ｏｒ Ｓ）Ｆ（Ｔ ｏｒ Ｓ）；配列番号：５］；ＦＲＨ２，［ＷＶ（Ｒ ＯＲ Ｋ）ＱＡＰＧＱ ＧＬ（Ｑ ｏｒ Ｋ）ＷＭＧ；配列番号：６］；ＦＲＨ３，［ＲＦ（Ｖ ｏｒ Ａ）ＦＳＬＤＴ ＳＶ（Ｎ ｏｒ Ｓ）ＴＡＹＬＱＩＴＳＬ（Ｔ ｏｒ Ｎ）ＡＥＤＴＧ ＭＹＦＣ（Ｖ ｏｒ Ａ）（Ｒ ｏｒ Ｋ）；配列番号：７］；およびＦＲＨ４，［ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ Ｓ；配列番号：８］。]
[0031] 様々な実施態様によれば、軽鎖可変領域は、下記からなる群から選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含む：ＣＤＲＬ１［ＳＡＲＳＳＶＳＹＭＨ；配列番号：９］；ＣＤＲＬ２［ＲＴＳＮＬＡＳ；配列番号：１０］；ＣＤＲＬ３［ＱＱＲＳＳＦＰＬＴ；および配列番号：１１］。ここで、ＣＤＲはマウスのＢＡＴ−１抗体から誘導され、添え字「Ｌ」および「Ｈ」はそれぞれ、軽鎖および重鎖領域を示す。]
[0032] 様々な実施態様によれば、重鎖可変領域は、下記からなる群から選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含む：ＣＤＲＨ１［ＮＹＧＭＮ； 配列番号：１２］；ＣＤＲＨ２［ＷＩＮＴＤ ＳＧＥＳＴ ＹＡＥＥＦ ＫＧ；配列番号：１３］；およびＣＤＲＨ３［ＶＧＹＤＡ ＬＤＹ；配列番号：１４］。]
[0033] 様々な実施態様によれば、ヒト化抗体は、
ＢＡＴＲＫＡ（配列番号：１５），ＢＡＴＲＫＢ（配列番号：１６），ＢＡＴＲＫＣ（配列番号：１７），およびＢＡＴＲＫＤ（配列番号：１８）からなる群から選択される軽鎖可変領域と；
Ａ（配列番号：２０），ＢＡＴＲＨＢ（配列番号：２１），ＢＡＴＲＨＣ（配列番号：２２），ＢＡＴＲＨＤ（配列番号：２３）およびＢＡＴＲＨＥ（配列番号：２４）からなる群から選択される重鎖可変部とを含む。]
[0034] さらに他の実施態様によれば、ヒト化抗体は、下記からなる群から選択される可変領域を含む：ＢＡＴＲＨＡ／ＢＡＴＲＫＡ（配列番号：２０／配列番号：１５），ＢＡＴＲＨＢ／ＢＡＴＲＫＡ（配列番号：２１／配列番号：１５），ＢＡＴＲＨＢ／ＢＡＴＲＫＢ（配列番号：２１／配列番号：１６），ＢＡＴＲＨＣ／ＢＡＴＲＫＢ（配列番号：２２／配列番号：１６），ＢＡＴＲＨＢ／ＢＡＴＲＫＤ（配列番号：２１／配列番号：１８），およびＢＡＴＲＨＣ／ＢＡＴＲＫＤ（配列番号：２２／配列番号：１８）。]
[0035] 様々な好ましい実施態様によれば、ヒト化モノクローナル抗体は、ＢＡＴＲＨＣ／ＢＡＴＲＫＤ（配列番号：２２／配列番号：１８）に対応する可変領域を有する。]
[0036] 様々な実施態様によれば、ヒト化抗体または断片単独の抗腫瘍活性は、ｍＢＡＴ−１と同じまたはそれより大きい。]
[0037] 様々な実施態様によれば、ヒト化抗体の断片は、下記からなる群から選択される：Ｆｖ，Ｆ（ａｂ’），Ｆ（ａｂ’）２および単鎖抗体。]
[0038] 本発明のヒト化モノクローナル抗体は、組換えＤＮＡ技術、ＣＤＲ移植を利用することによって好ましくは発生する。したがって、ヒト化抗体はポリヌクレオチドの発現によって引き起こされ、ポリヌクレオチドは、全てのヒト化抗体、軽鎖可変領域、重鎖可変領域またはヒト化抗体の両鎖の可変領域をエンコードすることができる。更に、ヒト化抗体は、重鎖または軽鎖をエンコードするポリヌクレオチドを各々含む特徴的なベクターの共形質移入に従うか、または軽鎖および重鎖ポリヌクレオチド配列を含む単一ベクター形質移入によって、宿主細胞を発現する。]
[0039] 様々な実施態様によれば、ヒト化抗体の軽鎖は、下記からなる群から選択されるポリヌクレオチド配列によってエンコードされる：配列番号：８７、配列番号：８８および配列番号：８９。]
[0040] 様々な実施態様によれば、ヒト化抗体の重鎖は、下記からなる群から選択されるポリヌクレオチド配列によってエンコードされる：配列番号：９０、配列番号：９１および配列番号：９２。]
[0041] 様々な実施態様によれば、少なくとも一つの化学療法剤は、下記からなる群から選択される：代謝拮抗剤、白金に基づく薬剤、有糸分裂阻害剤、アントラサイクリン系抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤、抗血管形成剤およびそれらの組合せ。]
[0042] 一般的な好ましい実施態様によれば、少なくとも一つの化学療法剤は、化学療法剤と組み合わせて用いられるときｈＢＡＴ−１がリンパ球の生存を向上させるために選択される。一般的に、向上または増加した生存性を、以下に例証されるように、生体外で都合よく評価することができる。]
[0043] いくつかの実施態様によれば、少なくとも一つの化学療法剤は代謝拮抗剤であり、それはプリン拮抗剤、ピリミジン拮抗剤および葉酸拮抗剤がある。いくつかの実施態様によれば、代謝拮抗剤は、ピリミジン拮抗剤である。いくつかの実施態様によれば、代謝拮抗剤は、下記からなる群から選択される：５‐フルオロウラシル、ウラシルマスタード、ウラシル、カペシタビン、６−メルカプトプリン、メトトレキサート、ゲムシタビン、シタラビン、フルダラビンおよびペメトレキセド。]
[0044] いくつかの実施態様によれば、少なくとも一つの化学療法剤は、５−フルオロウラシルである。]
[0045] いくつかの実施態様によれば、少なくとも一つの化学療法剤は、シタラビンである。]
[0046] いくつかの実施態様によれば、少なくとも一つの化学療法剤は、下記からなる群から選択される白金に基づく薬剤である：シスプラチン、カルボプラチンおよびオキサリプラチン。]
[0047] さらに他の実施態様によれば、少なくとも一つの化学療法剤は、下記からなる群から選択される有糸分裂阻害剤である：パクリタキセル、ドセタキセル、エトポシド、ビンブラスチン、ビンクリスチンおよびビノレルビン。]
[0048] さらに他の実施態様によれば、少なくとも一つの化学療法剤は、下記からなる群から選択されるアントラサイクリン系抗生物質である：ダウノルビシン、レスピノマイシンＤおよびイダルビシン。]
[0049] いくつかの実施態様によれば、少なくとも一つの化学療法剤は、下記からなる群から選択される抗血管形成剤である：ベバシズマブ、ドーパミン、テトラチオモリブデートおよびＶＥＧＦの抗血管形成活性の異型。]
[0050] いくつかの実施態様によれば、少なくとも一つの化学療法剤は、トポイソメラーゼＩ阻害剤以外である。いくつかの実施態様によれば、少なくとも一つの化学療法剤は、アルキル化剤以外である。]
[0051] 様々な実施態様によれば、ヒト化抗体および、少なくとも１つの化学療法剤の投与は、実質的に同時、並行、交替、順次または連続して実行される。いくつかの実施態様において、ヒト化抗体および少なくとも一つの化学療法剤は、重なり合う計画に従って投与される。]
[0052] 特定の実施態様によれば、ヒト化抗体の投与は、少なくとも一つの化学療法剤の最初の投与の前に実行される。]
[0053] 他の実施態様によれば、ヒト化抗体および少なくとも１つ化学療法剤のいずれかまたは両方の投与は、静脈内、経口、腹腔内、皮下、単離された四肢潅流、器官内への持続注入およびそれらの組合せからなる群から選択される経路によって実行される。]
[0054] 様々な実施態様によれば、その方法は、照射で対象を治療することを更に含む。様々な実施態様によれば、その方法は、ヒト化抗体の投与、少なくとも一つの化学療法剤の投与および、対象を照射で治療することの全てを含む。]
[0055] いくつかの実施態様によれば、ヒト化抗体、少なくとも一つの化学療法剤および放射線療法は、実質的に同時、並行、交替、連続または重なり合う計画によって投与される。]
[0056] 特定の実施態様において、本発明の方法は、下記の群から選択される少なくとも１つのパラメーターを評価することを更に含む：腫瘍成長の率、腫瘍体積、転移の数、腫瘍再発およびそれらの組合せ。]
[0057] いくつかの実施態様において、腫瘍は、固形または非固形の腫瘍である。いくつかの実施態様において、非固形腫瘍は、血液学的な悪性腫瘍である。特定の実施態様において、腫瘍は、結腸直腸癌腫腫瘍からなる群から選択される；非小肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍；小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）腫瘍；乳癌腫瘍；メラノーマ腫瘍；卵巣悪性腫瘍；子宮頚癌腫瘍；膵臓癌腫瘍；頭頸部癌腫腫瘍；胃腸癌腫腫瘍；食道腫瘍；肝細胞癌腫瘍；多発性骨髄腫；腎細胞癌腫瘍；前立腺腫瘍；非ホジキンリンパ腫；ホジキン病；マントル細胞リンパ腫；カポシ肉腫；扁平上皮癌腫瘍；基底細胞癌腫瘍；急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）；慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）；急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）および慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）。]
[0058] 様々な実施態様によれば、対象は、ヒトまたはヒト以外の哺乳類である。様々な好ましい実施態様によれば、対象はヒトである。]
[0059] 更なる態様において、本発明は、（ｉ）ヒト化モノクローナル抗体またはその断片の使用であって、抗体またはその断片は受容体ヒト免疫グロブリンまたはその修飾物から、マウスのモノクローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）およびフレームワーク領域（ＦＲ）の少なくとも一つの相補性決定領域を有するものと；（ｉｉ）少なくとも一つの化学療法剤とを；腫瘍を治療するために薬物の製造に関する使用を提供する。]
[0060] 別の態様においては、本発明は、ヒト化モノクローナル抗体またはその断片であって、抗体またはその断片は受容体ヒト免疫グロブリンまたはその修飾物から、マウスのモノクローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）およびフレームワーク領域（ＦＲ）の少なくとも一つの相補性決定領域を有し；少なくとも一つの化学療法剤を受けている対象における化学療法の腫瘍の治療で提供する。]
[0061] 更なる態様において、本発明は、ヒト化モノクローナル抗体またはその断片の使用であって、抗体またはその断片は受容体ヒト免疫グロブリンまたはその修飾物から、マウスのモノクローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）およびフレームワーク領域（ＦＲ）の少なくとも一つの相補性決定領域を有し、前記少なくとも一つの化学療法剤で化学療法を受けている対象における少なくとも一つの化学療法剤に対する許容度を向上させる薬物の製造での使用を提供する。]
[0062] 更なる態様において、本発明は、ヒト化モノクローナル抗体またはその断片であって、抗体またはその断片は、受容体ヒト免疫グロブリンまたはその修飾物から、マウスのモノクローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）およびフレームワーク領域（ＦＲ）の少なくとも一つの相補性決定領域を有し、前記少なくとも一つの化学療法剤で化学療法を受けている対象における少なくとも一つの化学療法剤に対する許容度の向上を提供する。]
[0063] 他の態様によれば、本発明は、ヒト化モノクローナル抗体またはその断片の使用であって、抗体またはその断片は受容体ヒト免疫グロブリンまたはその修飾物から、マウスのモノクローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）およびフレームワーク領域（ＦＲ）の少なくとも一つの相補性決定領域を有し；腫瘍を有する対象であって、この対象は少なくとも一つの化学療法剤で治療されて、生存性の向上または疾患進行を阻害するための薬物の製造に関する使用を提供する。]
[0064] 他の態様によれば、本発明は、ヒト化モノクローナル抗体またはその断片であって、抗体またはその断片は受容体ヒト免疫グロブリンまたはその修飾物から、マウスのモノクローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）およびフレームワーク領域（ＦＲ）の少なくとも一つの相補性決定領域を有し；腫瘍を有する対象であって、この対象は少なくとも一つの化学療法剤で治療されるものにおける、生存性の向上または疾患進行を阻害するためのヒト化モノクローナル抗体またはその断片を提供する。]
[0065] さらにもう一つの態様によれば、本発明は、ヒト化モノクローナル抗体またはその断片の使用であって、抗体またはその断片は受容体ヒト免疫グロブリンまたはその修飾物から、マウスのモノクローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）およびフレームワーク領域（ＦＲ）の少なくとも一つの相補性決定領域を有し；腫瘍の再発を減少または予防する薬物の製造に関する使用を提供する。]
[0066] さらにもう一つの態様によれば、本発明は、ヒト化モノクローナル抗体またはその断片であって、抗体またはその断片は受容体ヒト免疫グロブリンまたはその修飾物から、マウスのモノクローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）およびフレームワーク領域（ＦＲ）の少なくとも一つの相補性決定領域を有し；腫瘍の再発を減少または予防するためのヒト化モノクローナル抗体またはその断片を提供する。]
[0067] 特定の実施態様によれば、対象は、少なくとも１つの化学療法剤で化学療法を受けていたか、受けているか、または、受ける予定である。]
図面の簡単な説明

[0068] 図１は、賦形剤コントロール（灰色バー）または５ＦＵ（０．５ｍｇ／ｍＬ、白バー）との組み合わせを付随して培養組織に加え７２時間培養されるとき、リンパ球の生存度に基づく分析におけるｈＢＡＴ−１の効果を示す。図１Ａは５ＦＵの非存在または存在下でのｈＢＡＴ−１活性（０．５または０．７５μｇ／ｍＬとして示す）で、細胞生存の差％として表す図である。図１Ｂは５ＦＵの非存在または存在下でのｈＢＡＴ−１（０．７５μｇ／ｍＬ）活性で、用量応答曲線に基づく領域で示す図である（ＡＵＣは％差×μｇ／ｍＬとして示す）。ｈＢＡＴ−１（７２時間）での培養時間を、ｘ軸に示す。図１Ｃは、機能的な分析における５ＦＵまたは賦形剤コントロールでの効果を生存可能な細胞／ｍＬとして示した図である。５ＦＵまたは賦形剤コントロール（７２時間）での培養時間をｘ軸に示す。
図２は、賦形剤コントロール（灰色バー）または５ＦＵ（０．５ｍｇ／ｍＬ、白バー）を加える前に２４時間培養してから加え、その後７２時間培養したときの、リンパ球の生存度に基づく分析におけるｈＢＡＴ−１の効果を示す。図２Ａは５ＦＵの非存在または存在下でのｈＢＡＴ−１活性（０．５または０．７５μｇ／ｍＬとして示す）を、細胞生存の差％として表す図である。図２Ｂは５ＦＵの非存在または存在下でのｈＢＡＴ−１（０．７５μｇ／ｍＬ）活性を、用量応答曲線に基づく領域で示す図である（ＡＵＣは％差×μｇ／ｍＬとして示す）。ｈＢＡＴ−１（７２時間）での培養時間を、ｘ軸に示す。
図３は、賦形剤コントロール（灰色バー）またはＳＮ−３８（イリノテカン０．１ｍｇ／ｍＬの活性型、白バー）加え、７２時間培養したとき、リンパ球の生存度に基づく分析におけるｈＢＡＴ−１の効果を示す。図３ＡはＳＮ−３８の非存在または存在下でのｈＢＡＴ−１活性（０．５または０．７５μｇ／ｍＬとして示す）を、細胞生存の％差として表す図である。図３ＢはｈＢＡＴ−１（０．７５μｇ／ｍＬ）活性を、用量応答曲線に基づく領域で示す図である（ＡＵＣは％差×μｇ／ｍＬとして示す）。ｈＢＡＴ−１（７２時間）での培養時間を、ｘ軸に示す。
図４は、賦形剤コントロール（灰色バー）またはＳＮ−３８（０．５ｍｇ／ｍＬ、白バー）を加える前に２４時間培養してから加え、その後７２時間培養したときの、リンパ球の生存度に基づく分析におけるｈＢＡＴ−１の効果を示す。図４ＡはＳＮ−３８の非存在または存在下でのｈＢＡＴ−１活性（０．５または０．７５μｇ／ｍＬとして示す）を、細胞生存の％差として表す図である。図４ＢはｈＢＡＴ−１（０．７５μｇ／ｍＬ）活性を、用量応答曲線に基づく領域で示す図である（ＡＵＣは％差×μｇ／ｍＬとして示す）。ｈＢＡＴ−１（７２時間）での培養時間を、ｘ軸に示す。
図５は、賦形剤コントロール（灰色バー）または、示される化学療法剤（白バー）を併用（図５Ａ）または加える前に２４時間培養（図５Ｂ）してから加え、その後７２時間培養したとき、リンパ球の生存度に基づく分析におけるｈＢＡＴ−１の効果を示す図である。Ｃｉｓ（シスプラチン（１０μｇ／ｍＬ））；Ｏｘａ，（オキサリプラチン（１０μｇ／ｍＬ））；Ｔａｘ，（パクリタキセル（０．４３μｇ／ｍＬ））；Ｄａｅ（ダカルバジン（１μｇ／ｍＬ））。ｈＢＡＴ−１（０．７５μｇ／ｍＬ）活性を、用量応答曲線に基づく領域で示す（ＡＵＣは％差×μｇ／ｍＬとして示す）。ｈＢＡＴ−１（７２時間）での培養時間を、ｘ軸に示す。
図６は、賦形剤コントロール（黒バー）または化学療法剤との組み合わせ（白バー）を加え、７２時間培養したとき、リンパ球の生存度に基づく分析におけるｈＢＡＴ−１（０．５または０．７５μｇ／ｍＬとして示す）の効果を示す図である。使用した化学療法剤は、シタラビン２ｍｇ／ｍＬ（図６Ａ）シクロホスファミド１ｍｇ／ｍＬ（図６Ｂ）およびドキソルビシン０．０３ｍｇ／ｍＬ（図６Ｃ）であった。ｈＢＡＴ−１活性は、細胞生存の％差として示される。
図７は、賦形剤コントロール（黒バー）または化学療法剤（白バー）を加える前に２４時間（０．７５μｇ／ｍＬで）加えてから、７２時間培養したとき、単離のヒトＣＤ４＋リンパ球の生存度に基づく分析におけるｈＢＡＴ−１の効果を示す図である。使用した化学療法剤は、５ＦＵ１μｇ／ｍＬ（図７Ａ）およびシスプラチン１０μｇ／ｍＬ（図７Ｂ）であった。ｈＢＡＴ−１活性を細胞生存の％差として示す。
図８は、結腸直腸腺癌（ＣＲＣ）になるマウスの、賦形剤（黒丸）；５ＦＵ（６〜９および１５〜１６日に２０ｍｇ／ｋｇ投与；白い四角）；ｈＢＡＴ−１（１０日に１０μｇ／マウス投与；黒い四角）；ならびにｈＢＡＴ−１（１０日に１０μｇ／マウス投与）および５ＦＵ（６〜９および１５〜１６日に２０ｍｇ／ｋｇ投与）の組合せ処方（白丸）における抗癌効果を示す図である。
図９は、ＣＲＣになるマウスの、５ＦＵ（６〜９、１５〜１７、２２〜２４および２９〜３１日に２０ｍｇ／ｋｇ投与；白い四角）ならびに、ｈＢＡＴ−１（１０、１８および２５日に１０μｇ／マウス投与）および５ＦＵ（６〜９、１５〜１７、２２〜２４および２９〜３１日に２０ｍｇ／ｋｇ投与）の組合せ処方（白い三角）における抗癌効果を示す図である。
図１０は、賦形剤（白丸）；５ＦＵ（６〜９、１５〜１７、２２〜２４、２９〜３１、３６〜３８および４３〜４５日に２０ｍｇ／ｋｇ投与；黒い三角）； ｈＢＡＴ−１（１０、１８、２５、３２および３９日に１０μｇ／マウス投与；黒い四角）；ならびにｈＢＡＴ−１（１０、１８、２５、３２および３９日に１０μｇ／マウス投与）および５ＦＵ（６〜９、１５〜１７、２２〜２４、２９〜３１、３６〜３８および４３〜４５日に２０ｍｇ／ｋｇ投与）の組合せ処方（黒い菱形）で処理したＣＲＣになるマウスの生存性の割合を示す図である。
図１１は、５ＦＵ（１〜４および７〜８日に５０ｍｇ／ｋｇ投与；黒い菱形）またはｈＢＡＴ−１（１０日に１０μｇ／マウス投与）および５ＦＵ（１〜４および７〜８日に５０ｍｇ／ｋｇ投与）の組合せ処方（白い四角）で処理し、Ｂ１６メラノーマ細胞で注射したマウスの生存性の割合を示す図である。
図１２はＣＲＣになるマウスの、賦形剤（黒丸）；イリノテカン（７および１５日に１００ｍｇ／ｋｇ投与；黒い四角）；ｈＢＡＴ−１（１０日に１０μｇ／マウス投与；白丸）；ならびにｈＢＡＴ−１（１０日に１０μｇ／マウス投与）およびイリノテカン（７および１５日に１００ｍｇ／ｋｇ投与）の組合せ処方（白い三角）で処理して、平均腫瘍体積によって評価して、抗癌効果を示す図である。
図１３は、賦形剤（黒丸）；イリノテカン（７および１５、２２および２９日に１００ｍｇ／ｋｇ投与；黒い三角）；ｈＢＡＴ−１（１０、１８、２５および３２日に１０μｇ／マウス投与；白い四角）；ならびにｈＢＡＴ−１（１０、１８、２５および３２日に１０μｇ／マウス投与）およびイリノテカン（７および１５、２２および２９日に１００ｍｇ／ｋｇ投与）の組合せ処方（黒色菱形）で処理したＣＲＣになるマウスの生存性の割合を示す図である。
図１４は、ＣＲＣになるマウスの、賦形剤（黒丸）での治療に；オキサリプラチン（４、７〜１０、１４〜１７および２２〜２３に１ｍｇ／ｋｇ投与；白い四角）；ならびにＣＲＣになるマウスのｈＢＡＴ−１（１１および１８日に１０μｇ／マウス投与）およびオキサリプラチン（４、７〜１０、１４〜１７および２２〜２３日に１ｍｇ／ｋｇ投与）の組合せ処方計画（黒い三角）で処理し、平均腫瘍体積によって評価して、抗癌効果を示す図である。
図１５は、ＣＲＣになるマウスの、賦形剤（黒丸）；オキサリプラチン（４、７〜１０、１４〜１７、２２〜２４、２９〜３１日に１ｍｇ／ｋｇ投与；白い四角）；ならびにｈＢＡＴ−１（１１、１８、２５および３２日に１０μｇ／マウス投与）およびオキサリプラチン（４、７〜１０、１４〜１７、２２〜２４、２９〜３１日に１ｍｇ／ｋｇ投与）の組合せ処方（黒い三角）で処理して生存性の割合を示す図である。
図１６はｈＢＡＴ−１および腫瘍再発に対して予防する化学療法剤の組合せの効果を、平均腫瘍体積（図１６Ａ）および生存性の割合（図１６Ｂ）によって評価して示す図である。そしてｈＢＡＴ−１およびオキサリプラチンの組合せ処方により、２または５ヵ月間ＣＲＣの治療したマウス（ｎ＝３）を、同じＣＲＣ細胞系で再度試す（白い四角）。さらに、実験に使われていない(naive)マウス（ｎ＝６）を、ＣＲＣで新しく導入した（黒丸）。
図１７はｈＢＡＴ−１および腫瘍再発に対して予防する化学療法剤の組合せの効果を、平均腫瘍体積（図１７Ａ）および生存性の割合（図１７Ｂ）によって評価して示す図である。それからｈＢＡＴ−１およびオキサリプラチンの組合せ処方によってＣＲＣをあらかじめ治療したマウス（ｎ＝２）を、同じＣＲＣ細胞系による試みで腫瘍再発の欠如によって示したように、乳癌で再度試す（白い四角）。乳癌での試みを、マウスがＣＲＣ腫瘍再発に対して抵抗を呈した２ヵ月後に実行した。さらに、実験に使われていないマウス（ｎ＝６）を、ＣＲＣで新しく導入した（黒丸）。
図１８は、ｈＢＡＴ（１μｇ／ｍＬ）で処理して、その後７２および９６時間培養することによって、ヒトＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ＋作用因子／記憶Ｔ細胞（黒いバー）および、実験に使われていないＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ−Ｔ細胞（白バー）を使用して、細胞生存率測定においてＣＴ−１１の効果を示す。その結果を、細胞生存の％差として示す図である。
図１９は、ヒト化ＢＡＴ−１ ＶＫ領域（配列番号１５〜１８）の様々な実施態様のアミノ酸配列を示す図である。ＢＡＴ−１ ＶＫ領域残基およびヒトＴＥＬ９ ＶＫ領域（配列番号１３０）配列が一致する所を点［．］で示す。アミノ酸が特定の残基位置で存在しない所はダッシュ［−］で示す。ＴＥＬ９ ＦＲｓのアミノ酸がヒト化ＢＡＴ−１ ＶＫ領域において変更される場合には、それを太字体で強調する。ＣＤＲｓを、命名法［＝Ｌ１＝］の使用によって記載する。使用する番号の付け方は、Kabatによるものである(Kabat et al., Sequences of proteins of immunological interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, U.S. Government Printing Office, 1991)。
図２０は、ヒト化ＢＡＴ−１ ＶＨ領域（配列番号２０〜２４）の様々な実施態様のアミノ酸配列を示す図である。ＢＡＴ−１ ＶＨ領域残基およびヒトｈｓｉｇｈｖ１２９５ ＶＨ領域（配列番号１４６）配列が一致する所を点［．］で示す。アミノ酸が特定の残基位置で存在しない所はダッシュ［−］で示す。ｈｓｉｇｈｖ１２９５ ＦＲｓのアミノ酸がヒト化ＢＡＴ−１ ＶＨ領域で変更される場合には、それを太字体で強調する。ＣＤＲｓを命名法［＝Ｈ１＝］の使用によって記載し、［−−−−−］はＨ１構造ループの部分を意味する。使用する番号付けは、Ｋａｂａｔによるものである（Kabat et al., ibid）。] 図１ 図１０ 図１１ 図１２ 図１３ 図１４ 図１５ 図１６ 図１６Ａ 図１６Ｂ
[0069] 定義
用語「抗体」（「免疫グロブリン」とも称する）は、最も広い意味で使用され、それらが所望の生物活性を示す限り、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）および抗体断片を特に含む。「抗体断片」は、完全長抗体の部分、一般に抗原結合またはその可変領域を含む。抗体断片の例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ断片；二重特異性抗体；線形抗体；単鎖抗体分子；および、抗体断片から形成した多特異的抗体を含む。]
[0070] 自然に生じる抗体構造の基本的な単位は約１５０，０００のダルトンのヘテロテトラマーグリコプロテイン錯体であり、２つの同一の軽鎖（Ｌ）および２つの同一の重鎖（Ｈ）からなり、非共有結合とジスルフィド結合の両方によって共に結合する。各々の重鎖および軽鎖はまた、規則通りに間隔をあけた鎖内のジスルフィド架橋を有する。５つのヒト抗体類（ＩｇＧ，ＩｇＡ，ＩｇＭ，ＩｇＤおよびＩｇＥ）が存在し、これらの類の範囲内で、様々なサブクラスを、構造差、例えば単一の抗体分子の免疫グロブリン単位の数、個々の単位のジスルフィド架橋構造および鎖長および配列の差に基づいて認識する。抗体の類およびサブクラスは、そのアイソタイプである。]
[0071] 重鎖および軽鎖のアミノ末端領域は、カルボキシ末端領域より多様な配列であり、したがって、可変領域と呼ばれる。抗体構造のこの部分は、抗体の抗原−結合特異性を付与する。重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）は共に単一の抗原結合部位を形成し、基本的な免疫グロブリン単位は２つの抗原結合部位を有する。特定のアミノ酸残基は軽鎖および重鎖可変領域の間の界面を形成することが考えられる(Chothia et al., J. Mol. Biol. 186, 651-63 (1985); Novotny and Haber, (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82 4592-4596)。]
[0072] 重鎖および軽鎖のカルボキシ末端部は、不変領域、すなわちＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＬを形成する。これらの領域では相違点がずっと少ない一方、１つの動物種から他の種までの差異があり、更に、同じ個体内で、いくつかの異なる抗体のアイソタイプがあり、各々が異なる機能を有する。]
[0073] 用語「フレームワーク領域」または「ＦＲ」は、本願明細書に定められるように、超可変領域アミノ酸残基以外である抗体の可変領域のアミノ酸残基をいう。本願明細書に使用するような用語「超可変領域」は抗原結合の役割を果たす抗体の可変領域のアミノ酸残基をいう。超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基を含む。ＣＤＲは、主に抗原のエピトープに結合する役割を果たす。ＦＲおよびＣＤＲの範囲は、正確に定められた（Kabat et al., ibid参照）。]
[0074] 用語「核受容体ヒトイムノブロブリン（ｉｍｍｕｎｏｂｌｏｂｕｌｉｎ）」は、ヒト化抗体に対してフレームワークを提供するヒト免疫グロブリンをいう。]
[0075] 本願明細書で使用しているように、用語「ヒト化抗体」は、ヒト抗体からのフレームワーク領域および、ヒト以外（通常マウスまたはラット）の免疫グロブリンからの一つ以上のＣＤＲを含む抗体を示す。ヒト化免疫グロブリンの部分、多分ＣＤＲ以外は、天然のヒト免疫グロブリン配列の対応する部分と、実質的に同一である。しかしながらいくつかの場合において、特定のアミノ酸残基、例えばフレームワーク領域を修飾して、ヒト化抗体の性能を最適化することができる。重要なことに、ヒト化抗体は、ＣＤＲを提供するドナー抗体と同じ抗原に結合することを予想される。詳しくは、例えば、医療審議会（英国）に譲渡された米国特許第５，２２５，５３９号を参照する。]
[0076] 用語「受容体ヒト免疫グロブリンからのフレームワーク領域」および「受容体ヒトイムノブロブリンから誘導されるフレームワーク領域」および類似の文法的な表現を、受容体ヒトのイムノブロブリンの同じアミノ酸配列を有するフレームワーク領域またはその部分を示すために本願明細書で交互に用いる。]
[0077] 用語「受容体ヒト免疫グロブリンから修飾されるフレームワーク領域」および類似の文法的な表現は、そのアミノ酸配列において変えられるフレームワーク領域を示し、例えば起源の受容体ヒトのイムノブロブリンの配列と比較して、一つ以上のアミノ酸残基の置換、欠落または化学修飾によるものである。ＦＲ領域の修飾を、構成されているヒト化抗体の性能を最適化、例えば抗原結合を最適化および立体的衝突を回避するために実行することができる。ヒト化ＢＡＴ抗体の構造に関する受容体免疫グロブリンのＦＲ領域における、特定の残基を修飾するための、詳細な説明の基礎および理論は、米国特許出願番号２００８／００２５９８０号で提供される。]
[0078] 更に、ＦＲは、一つ以上のアミノ酸残基で、処理することまたは他の翻訳後修飾のような天然の処理または化学的修飾技術によって、化学的に修飾することができる。化学修飾としては、アセチル化、アシル化、アミド化、ＡＤＰリボシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、液体もしくは脂質の誘導体の共有結合、メチル化、ミリスチル化、ペグ化、プレニル化、リン酸化、ユビキチン化（ubiqutination）またはいずれか類似した方法処理も含むが、これに限定されるものではない。]
[0079] 用語「ヒト抗体」は、ヒトまたは対立遺伝子、それの異型もしくはまたは変異体で現実に生じる遺伝子によってエンコードされる抗体を示す。]
[0080] 本願明細書に使われるように、用語「抗癌効果」は有益な生体影響を示し、それは腫瘍体積の減少または安定化、腫瘍細胞の数の減少または安定化、腫瘍成長の率の減少または安定化、転移の数の減少または安定化、腫瘍再発からの予防、腫瘍を有する対象の寿命の増加もしくは生存性、腫瘍を有する対象の疾患進行なく寿命の増加もしくは生存性または、癌性状態と関連した様々な生理的症状の改善の一つ以上のいずれかよって現わすことができる。「抗癌効果」はまた、第一段階で腫瘍の発生または腫瘍の再発を防ぐ本発明の組合せの能力によって現わすことができる。その特性を与えることで、本発明の方法を、急性、潜伏中、制御中または安定化の癌の治療および癌予防で用いることができる。]
[0081] 用語「哺乳類」はイヌおよびネコのようなペットの動物、ブタ、牛、ヒツジおよびヤギのような家畜；マウスおよびラットのような実験動物；モンキー、サルおよびチンパンジーのような霊長類；および好ましくはヒトを含むいずれかの哺乳類を意味する。]
[0082] 本発明のヒト化抗体に関する用語「有効量」および（複数の）化学療法剤は、過剰または制御不能の有害な副作用を引き起こさずに、治療効果を達成するために必要とする各々のこれらの活性薬剤の量を意味することを理解すべきである。治療上の結果を達成するために必要とする有効量は、例えば、特定の種類の腫瘍および患者の状態の酷さ、およびその組合せが照射と更に共投与するかどうかを含む多くの要素に依存することができる。活性薬剤の有効量（用量）は、本発明の状況において、時間とともに対象の有益な治療反応で効果を与えるのに十分であり、それは腫瘍成長の阻害、腫瘍成長の率の減少、腫瘍および転移成長の防止ならびに改善した生存性の阻害を含む。]
[0083] 本願明細書に用いられるように、用語「改善した生存性」は、対象または患者が本発明の方法で治療することで生存する持続性の延べ時間を示す。改善した生存性は、特定の治療の後に癌を患っている個体で、疾患進行がないままの増加する可能性を意味する。それはまた、対照群と比較して、疾患が時間の特定された期間の後に安定（進行の徴候を示さない）したままとなる群において、個体の高い割合を説明するために用いる。それはまた、対照群と比較して、疾患が時間の特定された期間の後に治療（疾患の徴候を示さない）した群において、個体の高い割合を説明するために用いる。このパラメーターは、特定の治療の有効性の徴候として用いられる「無進行生存」、「全体的な生存性」および「疾患のない生存性」として意味される通例の臨床終了点のいずれかによって測定することができる。]
[0084] 用語「化学療法剤に対する許容度」は、一つ以上の化学療法剤での治療と関連した有害な副作用を許容するために、対象の生理的、物理化学的および、免疫学的な能力を示す。したがって、用語「化学療法剤に対する改善した許容度」は、このような有害な副作用に生理的および物理化学的な能力を増加させることを示し、例えば有害な副作用のひどさを減少および／または、副作用の数を減少したことである。したがって、「化学療法剤に対する改善した許容度」は、化学療法剤で治療される癌患者の生命の質を改善することで示すことができる。]
[0085] 用語「腫瘍再発」は、起源の腫瘍の成長が逆転、抑制または阻害された期間によって、同じ位置または異なる位置のいずれかで同種類の腫瘍の、再現、再発、再成長または増殖をいう。]
[0086] 本願明細書において用いられる用語「リンパ球生存性を改善または増加」は、一つの治療のみで同一の細胞群の生存度と比較して、生体外または生体内でリンパ球の生存度を延長する治療における特定の組合せの能力をいう。例えば、ｈＢＡＴ−１および化学療法剤の一定の組合せは、本願明細書の実施例１で例証したように、生体外分析法で評価したような、リンパ球生存性を改善する。]
[0087] 本発明の方法
癌免疫治療学は、概して、腫瘍細胞の死滅およびコントロール腫瘍の成長を誘導または改善するために免疫系の反応を調整することを目的とする。この方法は、Ｔ細胞上の特定の関与因子に選択的に結合し、それによって活性化経路を開始または阻害効果を誘導するいずれかであるモノクローナル抗体を含む様々な免疫修飾物質を用いることを利用する。]
[0088] 一定の本発明の態様によれば、少なくとも一つの抗腫瘍化学療法剤と連携した免疫賦活性ヒト化抗体の投与は、化学療法剤の抗癌効果を向上およびその逆で作用する。好ましい実施態様において、少なくとも一つの化学療法剤と免疫賦活性抗体の組合せは、各々の治療のみに対して重要な方法の臨床結果を改善する。好ましい実施態様において、腫瘍が少なくとも一つの化学療法剤と連携、任意選択で、照射と更に連携して本発明のヒト化抗体で治療されるとき、相乗効果がある。]
[0089] 言い換えれば、本発明の一態様によれば、本発明のヒト化抗体の抗癌効果は、少なくとも一つの化学療法剤と組み合わすとき予想されるものより増加する。相乗効果は、ヒト化抗体および（複数の）化学療法剤の、各々単独での治療の相加効果から予想されるものより、組み合わせ治療での大きな抗癌効果によって示すことができる。例えば、相乗効果を、本願明細書の実施例２、３および６で説明し、それは、本発明による組み合わせ治療が腫瘍体積および担癌マウスの生存性を測定して、抗体または化学療法のみのいずれかの効果との比較することによって、増加する抗癌効果を及ぼすことを開示する。より詳細には、腫瘍体積の効果の評価において、図８はｈＢＡＴ−１および５ＦＵの組合せの投与が、各々の薬剤単独を超える利益があることを示し、図９はｈＢＡＴ−１および５ＦＵの組合せが５ＦＵ単独を超える相乗作用であることを示す。同様に、生存性の効果の評価において、ｈＢＡＴ−１および５ＦＵの組合せの投与が、各薬剤のみ（図１０）および、５ＦＵのみ（図１１）を超える利益があることを説明した。異なる組合せ、すなわち、ｈＢＡＴ−１およびオキサリプラチンは、生存性を増加させる際のオキサリプラチンを超える利益があるだけでなくて、さらにいくつかの対象の完全寛解を誘導する（図１５）。相乗効果をまた、本発明の複合治療で治療した担癌マウスにおける完全寛解および、腫瘍に特有の記憶領域保護の生成によって、対応する単一療法と比較して説明する（図１０、１５、１６、１７）。] 図１０ 図１１ 図１５ 図８ 図９
[0090] 本発明の組合せによって行われる生体内の効果は、本願明細書の実施例１にて開示したように、リンパ球細胞生存の生体外機能的な分析によって裏づけられる。例証したように、ｈＢＡＴ−１に続いて５ＦＵ（２４時間経過後投与）によるマウスのリンパ球の経時的な治療は予想外に、約３０％のリンパ球生存性を改善した（図２Ａ）。ｈＢＡＴ−１および５ＦＵのみでリンパ球の併用療法は、ｈＢＡＴ−１のみでの治療と比較して、リンパ球生存性をわずかに増加させ（図１Ａ）、５ＦＵ単独では細胞生存性を改善しなく（図１Ｃ）、経時的な予定した治療の機構的な相乗効果を示す。相乗作用の活性をまた、化学療法剤のシスプラチンおよびヒト化抗体の組合せでの生体外分析法で観察した（図７Ｂ）。したがって、一定の化学療法剤と、本発明のヒト化抗体の組み合わせは、生体外および生体内での相乗効果を生じる。] 図１Ａ 図１Ｃ 図２Ａ 図７Ｂ
[0091] 本願明細書で開示および例証される相乗効果は、ＢＡＴ抗体および化学療法剤が完全に異なり、反対の作用機構および標的の種類を有することが知られていると仮定すると、全く予想外である。すなわち、ＢＡＴ抗体は免疫機能細胞を刺激することによって機能（例えばHardy et al 1994; Hardy et al 1997に記載）し、一方、５ＦＵおよびオキサリプラチンのような化学療法剤は免疫機能細胞を含む分裂細胞を急速に死滅させることによって作用する。]
[0092] 本願明細書に例証されるような、本発明による組合せは、本発明のヒト化抗体と組み合わせる化学療法剤の使用が、増加または改善したリンパ球細胞の生存性を説明するものである。実施例１および図１〜７にて開示したように、リンパ球細胞の生存性は、生体外分析を使用して、都合よく評価することができる。] 図１ 図２ 図３ 図４ 図５ 図６ 図７
[0093] したがって、様々な実施態様で、化学療法剤は、ピリミジン類似体の５‐フルオロウラシルまたはシタラビンのような代謝拮抗剤または、オキサリプラチンまたはシスプラチンのような白金に基づく薬剤から選択することができる。更に、様々な実施態様において、化学療法剤は、トポイソメラーゼＩ阻害剤（例えばＳＮ−３８）およびアルキル化剤（例えばシクロホスファミド）から選択される薬剤以外であることができる。本発明の組合せによって誘導される抗癌効果は、予防、腫瘍の進行の阻害、腫瘍成長の減少および癌性および非癌性腫瘍を含む腫瘍再発からの保護を含む。腫瘍の進行は、侵入、転移、再発および腫瘍の大きさの増加を含む。腫瘍成長の減少はまた、完全寛解に導く腫瘍の滅失または除去を含む。]
[0094] さらに、本発明が、化学療法剤に対する許容度を改善するために効果的であると更に見出した。従来技術で知られるように、癌化学療法を受ける患者に関する主な障害は、ほとんどの化学療法剤の強力な毒性による重症および有害な副作用の出現である。本願明細書の実施例３に例証したように、用量制限毒性（ＤＬＴ）濃度で、５ＦＵと組み合わせてヒト化ＢＡＴ抗体（ＣＴ−０１１）の使用は、経時的な投与計画を用いて、マウスの向上した生存性を生じる。これらの観測は、化学療法を受ける患者の化学療法剤に対する許容度を改善するためのヒト化ＢＡＴ抗体の使用を立証する。]
[0095] 本発明は、更に、腫瘍を有する対象の生存性を向上させる方法を提供し、それは本発明のヒト化抗体の投与、それ自身または、任意選択で、一つ以上の化学療法剤の更なる投与と組み合わせることを含む。例えば、ヒト癌患者（実施例８）のＣＴ−０１１によって誘導される「治癒」効果は、このような抗体単一療法を立証する。本発明の態様は、化学療法が失敗した場合または患者が化学療法剤を許容することができない場合において、特に有益である。]
[0096] 本発明は、更に、腫瘍の再発を減少または予防する方法を提供し、それは本発明のヒト化抗体の投与、それ自身または、任意選択で、一つ以上の化学療法剤の更なる投与と組み合わせることを含む。本願明細書の実施例６に説明されるように、本発明のヒト化抗体および化学療法剤を用いる実験動物の組合せ治療は、腫瘍再発を起源の腫瘍型による再誘導で抑制するような「記憶」効果を、明らかに誘導する。]
[0097] 全種類の腫瘍を、本発明の方法によって治療することができる。この腫瘍は、固体または非固形であることができる。]
[0098] 本発明の組合せで治療することができる固形腫瘍のいくつかの例は、癌腫、肉腫、芽細胞腫または膠腫がある。このような腫瘍のいくつかの例は、表皮状腫瘍、頭頸部腫瘍のような扁平上皮腫瘍、結腸直腸腫瘍、前立腺腫瘍、胸部腫瘍、小細胞および非小細胞肺腫瘍を含む肺腫瘍、膵臓腫瘍、甲状腺腫瘍、卵巣腫瘍、肝腫瘍、食道腫瘍および胃腫瘍がある。他の例は、カポシ肉腫、中枢神経系腫瘍、神経芽細胞腫、毛管の血管芽細胞腫、髄膜腫および脳転移、黒色腫、胃腸および腎臓の癌腫および肉腫、横紋筋肉腫、神経グリア芽細胞腫、好ましくは多形性神経膠芽腫ならびに平滑筋肉腫がある。血管性皮膚癌の例は、悪性ケラチン合成細胞、例えばヒト悪性ケラチン合成細胞の成長を抑制することによって治療することができる扁平上皮癌、基底細胞癌および皮膚癌がある。]
[0099] 非固形腫瘍のいくつかの例は、白血病、多発性骨髄腫およびリンパ腫がある。白血病のいくつかの例は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、赤血球白血病または単球性白血病がある。リンパ腫のいくつかの例は、ホジキン病、非ホジキン病またはマントル細胞リンパ腫を伴うリンパ腫がある。]
[0100] 腫瘍の一般に好ましい種類は、以下の群から選択される：結腸直腸癌腫；非小肺癌（ＮＳＣＬＣ）および小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）を含む肺癌腫；乳癌；黒色腫；卵巣悪性腫瘍；子宮頚癌（膵臓癌）；頭頸部癌腫；胃腸の癌腫；食道腫瘍；肝細胞癌；多発性骨髄腫；腎細胞癌；前立腺腫瘍；非ホジキンリンパ腫；ホジキン病；マントル細胞リンパ腫；カポシ肉腫；扁平上皮癌；基底細胞癌；急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）；慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）；急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）。]
[0101] 本発明の教示によれば、本発明のヒト化抗体が化学療法を開始する前、間または後で、任意選択で放射線療法ならびに、それらのいずれかの組合せ、すなわち、化学療法および、任意選択で、放射線療法を開始する前、間または後に投与することができる点に留意する必要がある。例えば、本発明の抗体を、化学療法を開始する前後の、１〜３０日の間で投与することができる。この抗体は、化学療法の経過の間で、更に投与されることができる。]
[0102] 本発明の複合治療方法において、抗体を、例えば実質的に同時または並行で、化学療法と並行して投与することができる。例えば、他の投与計画をまた、例えば重複計画（overlappingschedule）または、２種類の治療を、交替、順次または連続して投与することを含むものを用いることができる。]
[0103] 本発明のヒト化抗体
本願明細書で使用するように、用語「ＢＡＴ」および「ＢＡＴ抗体」は、広義に使われ、特にｍＢＡＴ−１またはその抗原結合分画として知られるマウスのモノクローナル抗体と同一またはそれに基づいた抗体に適用される。モノクローナル抗体ｍＢＡＴ−１は、米国特許第５，８９７，８６２号にて開示したように、Accession No.1-1397の下で、the Collection Nationale de Cultures de Microorganismes（ＣＮＣＭ）に寄託されるハイブリドーマ細胞線によって分泌される。更に「ＢＡＴ」および「ＢＡＴ抗体」は、ｍＢＡＴ−１、例えば米国特許出願番号２００３／００２６８００号にて説明したようなキメラ抗体と同じ抗原エピトープを認識する抗体を指すことができる。ＢＡＴ抗体はまた、国際公開０３／０９９１９６号および米国特許出願公開番号２００８／００２５９８０号において開示される様々な例のヒト化抗体を含む。用語「ＣＴ−０１１」、「ｈＢＡＴ」および「ｈＢＡＴ−１」は、本発明による１つのヒト化抗体を指すために、本願明細書で交互に用いる。]
[0104] 一般に、ヒト化モノクローナル抗体の軽鎖可変領域は、下記式によって特徴づけられる：
ＦＲＬ１−ＣＤＲＬ１−ＦＲＬ２−ＣＤＲＬ２−ＦＲＬ３−ＣＤＲＬ３−ＦＲＬ４
ここで、各々のＦＲは独立のヒト抗体のフレームワーク領域であり、各々のＣＤＲは独立のモノクローナルのｍＢＡＴ−１抗体の相補性決定領域である。]
[0105] 一般に、ヒト化モノクローナル抗体の重鎖可変領域は、下記式によって特徴づけられる：
ＦＲＨ１−ＣＤＲＨ１−ＦＲＨ２−ＣＤＲＨ２−ＦＲＨ３−ＣＤＲＨ３−ＦＲＨ４
ここで、各々のＦＲは独立のヒト抗体のフレームワーク領域であり、各々のＣＤＲは独立のモノクローナルのｍＢＡＴ−１抗体の相補性決定領域である。]
[0106] 特定の実施態様において、ＦＲｓは、ヒトＴＥＬ９抗体（配列番号：１３０）の軽鎖可変領域から誘導、または一定のアミノ酸残基でそこから修飾される。]
[0107] ヒトＴＥＬ−９抗体は、ワクチン接種を受けていないドナーの末梢血液リンパ球から調製される重（ＶＨ）および軽（ＶκおよびＶλ）鎖可変（Ｖ）遺伝子の免疫グロブリンの多様なライブラリで識別された(Marks et al. J Mol Biol. 1991, 222:581-97)。この抗体は、特に七面鳥卵白リゾチーム（ＴＥＬ）抗原に結合することを示した。ヒトＴＥＬ９抗体の軽鎖可変領域から誘導または修飾したＦＲアミノ酸配列は、下記からなる群から選択することができる：ＦＲＬ１，［ＥＩＶＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴ ＩＴＣ；配列番号：１］；ＦＲＬ２，［Ｗ（Ｆ ｏｒ Ｙ）ＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬ（Ｗ ｏｒ Ｌ）ＩＹ；配列番号：２］；ＦＲＬ３，［ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧ ＳＧＴ（Ｄ ｏｒ Ｓ）（Ｙ ｏｒ Ｆ）（Ｃ ｏｒ Ｔ）ＬＴＩＮＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹ Ｃ；配列番号：３］；およびＦＲＬ４，［ＦＧＧＧＴ ＫＬＥＩＫ； 配列番号：４］。]
[0108] 特定の実施態様において、ＦＲｓは、ヒトｈｓｉｇｈｖ１２９５抗体（配列番号：１４６）の重鎖可変領域から誘導、または一定のアミノ酸残基でそこから修飾される。]
[0109] ヒトｈｓｉｇｇｖ１２９５抗体は、慢性関節リウマチを患う３人の患者および、全身性エリテマトーデスを患う一人の患者の滑液または末梢血液から安定ハイブリドーマおよびエプスタイン−バールウイルス導入Ｂ細胞系から分離した(Fang et al., J Exp Med. 1994, 179:1445-56)。]
[0110] ヒトｈｓｉｇｈｖ１２９５抗体の重鎖可変領域から誘導または修飾したＦＲアミノ酸配列を、下記からなる群から選択することができる：ＦＲＨ１，［Ｑ（Ｉ ｏｒ Ｖ）ＱＬＶ ＱＳＧＳＥ ＬＫＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳ ＧＹ（Ｔ ｏｒ Ｓ）Ｆ（Ｔ ｏｒ Ｓ）；配列番号：５］；ＦＲＨ２，［ＷＶ（Ｒ ＯＲ Ｋ）ＱＡＰＧＱ ＧＬ（Ｑ ｏｒ Ｋ）ＷＭＧ；配列番号：６］；ＦＲＨ３，［ＲＦ（Ｖ ｏｒ Ａ）ＦＳＬＤＴ ＳＶ（Ｎ ｏｒ Ｓ）ＴＡＹＬＱＩＴＳＬ（Ｔ ｏｒ Ｎ）ＡＥＤＴＧ ＭＹＦＣ（Ｖ ｏｒ Ａ）（Ｒ ｏｒ Ｋ）；配列番号：７］；およびＦＲＨ４，［ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ Ｓ；配列番号：８］]
[0111] 様々な実施態様によれば、軽鎖可変領域は、下記からなる群から選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含む：ＣＤＲＬ１［ＳＡＲＳＳＶＳＹＭＨ；配列番号：９］；ＣＤＲＬ２［ＲＴＳＮＬＡＳ；配列番号：１０］；ＣＤＲＬ３［ＱＱＲＳＳＦＰＬＴ；および配列番号：１１］。ここで、ＣＤＲはマウスのＢＡＴ−１抗体から誘導され、添え字「Ｌ」および「Ｈ」はそれぞれ、軽鎖および重鎖領域を示す。]
[0112] 様々な実施態様によれば、重鎖可変領域は、下記からなる群から選択される少なくとも一つのアミノ酸配列を含む：ＣＤＲＨ１［ＮＹＧＭＮ； 配列番号：１２］；ＣＤＲＨ２［ＷＩＮＴＤ ＳＧＥＳＴ ＹＡＥＥＦ ＫＧ；配列番号：１３］；およびＣＤＲＨ３［ＶＧＹＤＡ ＬＤＹ；配列番号：１４］。]
[0113] 様々な実施態様によれば、ヒト化抗体は、
ＢＡＴＲＫＡ（配列番号：１５），ＢＡＴＲＫＢ（配列番号：１６），ＢＡＴＲＫＣ（配列番号：１７），およびＢＡＴＲＫＤ（配列番号：１８）からなる群から選択される軽鎖可変領域と；
Ａ（配列番号：２０），ＢＡＴＲＨＢ（配列番号：２１），ＢＡＴＲＨＣ（配列番号：２２），ＢＡＴＲＨＤ（配列番号：２３）およびＢＡＴＲＨＥ（配列番号：２４）からなる群から選択される重鎖可変部とを含む。]
[0114] さらに他の実施態様によれば、ヒト化抗体は、下記からなる群から選択される可変領域を含む：ＢＡＴＲＨＡ／ＢＡＴＲＫＡ（配列番号：２０／配列番号：１５），ＢＡＴＲＨＢ／ＢＡＴＲＫＡ（配列番号：２１／配列番号：１５），ＢＡＴＲＨＢ／ＢＡＴＲＫＢ（配列番号：２１／配列番号：１６），ＢＡＴＲＨＣ／ＢＡＴＲＫＢ（配列番号：２２／配列番号：１６），ＢＡＴＲＨＢ／ＢＡＴＲＫＤ（配列番号：２１／配列番号：１８），およびＢＡＴＲＨＣ／ＢＡＴＲＫＤ（配列番号：２２／配列番号：１８）。]
[0115] 様々な好ましい実施態様によれば、ヒト化モノクローナル抗体は、ＢＡＴＲＨＣ／ＢＡＴＲＫＤ（配列番号：２２／配列番号：１８）に対応する可変領域を有する。]
[0116] 一の実施態様において、ヒト化ＢＡＴ抗体は、配列番号：９０に記載したポリヌクレオチド配列によってエンコードすることができる配列番号２２に記載したような重鎖可変領域を有する。]
[0117] 一の実施態様において、ヒト化抗体は、配列番号：８９に記載したポリヌクレオチド配列によってエンコードすることができる配列番号１８に記載したような軽鎖可変領域を有する。本発明に用いられる適切なヒト化抗体のアミノ酸およびヌクレオチド配列は、米国特許出願番号２００８／００２５９８０号にて開示される。本発明で使用する適切な重鎖可変領域および軽鎖可変領域のヒト抗体フレームワーク部位は、例えば配列番号：１１１〜１２８および配列番号：１３０〜１４４をそれぞれ含む。]
[0118] 化学療法
化学療法剤は、癌細胞によるそれらの効果、薬が妨げる細胞の活性もしくは処理、または薬が影響を及ぼす細胞周期の特定相に基づいていくつかの群に分けられる。したがって、化学療法剤は、以下の区分のうちの１つに分類される：アルキル化剤、ニトロソ尿素化合物、代謝拮抗剤、アントラサイクリン系、トポイソメラーゼＩおよびＩＩ阻害剤、有糸分裂阻害剤、なかでも、白金に基づく薬、ステロイドおよび抗血管形成剤。]
[0119] 代謝拮抗剤（「ヌクレオシド類似体」とも呼ぶ）はＤＮＡ分子の細胞構築物として天然の物質に置換して、それによって、細胞代謝およびタンパク質合成のために必要な酵素の機能を変更する。それらが細胞発育のために必要な栄養分を模倣する結果、細胞は結局細胞溶解を受ける。ヌクレオシドが機能しないヌクレオシド類似体で置換される場合、後者はＤＮＡおよびＲＮＡに組み込まれ、最後に、ＤＮＡを合成する細胞の能力を阻害することによって細胞周期停止およびアポトーシスを誘導する。代謝拮抗剤は、それらが新規な細胞の形成のために新規なＤＮＡ合成を受ける細胞に主に作用するように、特定の細胞周期および細胞分裂のＳ期の間で最も効果的である。これらの薬と関連する毒性は、急速に成長して分裂する細胞で見られる。代謝拮抗剤の例は、プリン拮抗剤、ピリミジン拮抗剤および葉酸拮抗剤を含む。これらの薬剤は、Ｓ期の間、細胞に損傷を与え、白血病、胸部、卵巣および胃腸管の腫瘍、ならびに他の癌を治療するために共通で使用する。その代謝拮抗剤の具体的な例としては、５‐フルオロウラシル（５ＦＵとしても知られる）、カペシタビン、６−メルカプトプリン、メトトレキサート、ゲムシタビン、シタラビン、フルダラビンおよびペメトレキセドがある。]
[0120] 白金に基づく化学療法薬はいくつかの種々の方法でＤＮＡを架橋して、有糸分裂によって細胞分裂を妨げる。損傷を受けたＤＮＡはＤＮＡ修復機構を誘導し、修復が不可能であると判明すると、次々にアポトーシスを活性化する。ＤＮＡ変化の中で最も顕著なのは、プリン塩基での１，２−インターストランド架橋である。これらは、ほとんど９０％の付加物を形成する１，２−インターストランドｄ（ＧｐＧ）付加物および、残りは１，２−インターストランドｄ（ＡｐＧ）付加物を含む。１，３−インターストランドｄ（ＧｐＸｐＧ）付加物は生じるが、ヌクレオチド除去修復（ＮＥＲ）によって、容易に切除される。他の付加物は、インターストランド架橋と白金に基づく薬の活性に関与するために仮想した機能しない付加物とを含む。細胞タンパク質、特にＨＭＧ領域タンパク質との相互作用はまた、これが多分その主要な方法の作用でないけれども、有糸分裂を妨げる機構として促進された。白金基づく化学療法薬は、シスプラチンを含む（別名シスプラチナム）またはシス-ジアミンジクロリド白金ＩＩ（ＣＤＤＰ）、カルボプラチンおよびオキサリプラチンがある。シスプラチンは、それがアルキル基を全く有しなくアルキル化反応を実行することができないにもかかわらず、アルキル化剤にしばしば指定される。それはアルキル化剤類似に正確に分類される。白金に基づく化学療法薬は、肉腫、いくつかの癌腫（例えば小細胞肺癌および卵嚢癌）、リンパ腫および胚細胞腫瘍を含む様々な形の癌を治療するために用いられる。]
[0121] 分裂抑制剤は、細胞分裂に干渉する。この分類で最も既知の化学療法剤は、パクリタキセル（別名タキソール（登録商標）、「植物アルカロイド」、「タキサン」および「抗微小管薬剤」）である。ドセタキセルと共に、それは、タキサンの薬分類を構成する。しかしながら、他の有糸分裂阻害剤は、エトポシド、ビンブラスチンおよびビンクリスチンを含むがこれに限定されないものが知られている。パクリタキセルは、細胞分裂の間、正常微小管成長を妨げてそれらの機能を抑制することによって作用する；それはそれらの構造を高度に安定化させる。これは、柔軟な方法でその細胞骨格を使用する細胞の能力を無効にする。詳細には、パクリタキセルはチューブリンのβサブユニット、微小管の「細胞構築物」に結合し、パクリタキセルの結合は、適所にこれらの細胞構築物を固定する。その結果として生じる微小管／パクリタキセル錯体は、分解する能力がない。これは、微小管（動的不安定性と呼ぶ）の短縮および延長が他の細胞構成部分を移送するための機構として、それらの機能が必要であるので、細胞機能に悪影響を与える。例えば、有糸分裂の間、微小管は、２つの娘細胞核内にそれらの複製および次の分離の間に染色体を配置する。さらにまた、パクリタキセルは、アポトーシス停止タンパク質Ｂｃｌ−２（Ｂ細胞白血病２）に結合して、その機能を抑制することによって、癌細胞の予定細胞死（アポトーシス）を誘導する。]
[0122] 抗癌の化学療法において広く使用したＤＮＡ相互に作用する薬物の他の群は、アントラサイクリン系抗生物質の群であり、なかでも、ダウノルビシン、ドキソルビシン（別名アドリアマイシン（登録商標）および塩酸ドキソルビシン）、レスピノマイシンＤおよびイダルビシンがある。これらの薬は、高分子の生合成の挿入および阻害によってＤＮＡと相互に作用して、酵素トポイソメラーゼＩＩの進行を阻害して、転写でＤＮＡを巻き戻す。それらは、それが複製のためのＤＮＡ鎖を破壊した後、トポイソメラーゼＩＩ錯体を安定化させて、再封止されることからＤＮＡ二重螺旋を妨げ、複製の処理を停止する。それは、広範囲にわたる癌の治療で共通して用いられる。]
[0123] アルキル化抗腫瘍薬は、ＤＮＡを直接攻撃する。それらは、ＤＮＡ二重−螺旋鎖におけるＤＮＡの架橋性グアニン核酸塩基にアルキル基を攻撃する。これは、延伸および分離することができない鎖を作成する。これはＤＮＡ合成で必要であるように、細胞はもはや分裂することができない。これらの薬は、非特異的に作用する。シクロホスファミドはアルキル化剤であるが、それは非常に強力な免疫抑制物質である。]
[0124] トポイソメラーゼＩおよびＩＩ阻害剤はトポイソメラーゼＩおよび２の酵素活性にそれぞれ、干渉して、最終的にはＤＮＡ合成および転写の阻害に導く。トポイソメラーゼＩ阻害剤の例はトポテカンおよびイリノテカンがある。イリノテカンは、カルボキシエステラーゼ−転換酵素によって生物学的に活性の代謝産物７−エチル−１０−ヒドロキシ−カンプトテシン（ＳＮ−３８）に変換されるプロドラッグである。その親化合物イリノテカンより１０００倍強力なＳＮ−３８は、トポイソメラーゼＩとＤＮＡの間の開裂可能な複合体を安定させることによってトポイソメラーゼＩ活性を阻害し、ＤＮＡ合成を阻害およびアポトーシスの細胞死を誘導するＤＮＡ破壊を生じる。進行中のＤＮＡ合成は、イリノテカンがその細胞傷害効果を及ぼすために必要であるので、それはまたＳ期に特有の薬剤として分類される。トポイソメラーゼＩＩ阻害剤の例は、エトポシドおよびテニポシドがある。]
[0125] 血管新生を阻害する薬剤は、新規な血管の生成を妨げ、最終的には腫瘍の「飢餓」に導く。抗血管形成薬剤の非制限的な例は、モノクローナル抗体のベバシズマブ、ドーパミンおよびテトラチオモリブデートがある。]
[0126] 脈管内皮の成育因子（ＶＥＧＦ）は、血管拡張作用、増加する血管透過および血管内皮細胞マイトジェネシスの介在する３２〜４２ｋＤａの二量体のグリコプロテインである。ＶＥＧＦ遺伝子の差動のエキソンスプライシングは、３つの分泌されたアイソフォームでコードする３つの主ｍＲＮＡ種を生じる（添え字は、アミノ酸の数を意味する）：ＶＥＧＦ１８９、ＶＥＧＦ１６５およびＶＥＧＦ１２１。多くの小さいスプライス変異をまた記載した（ＶＥＧＦ２０６、ＶＥＧＦ１８３、ＶＥＧＦ１４５およびＶＥＧＦ１４８）。ＶＥＧＦポリペプチドの異型および癌治療でのそれらの用途は、例えば国際公開２００３／０１２１０５号で開示される。]
[0127] 照射
本発明のヒト化抗体および（複数の）化学療法剤と組み合わせて使うことができる放射線は、治療される患者に外部または体内のいずれかである。供与源は患者にとって外部のとき、治療法は外部的な線治療（ＥＢＲＴ）として知られている。放射線源は患者にとって体内のとき、治療は密封小線源治療（ＢＴ）と呼ばれている。]
[0128] 照射は、この目的のために製造される標準の装置、例えばＡＥＣＬ ＴｈｅｒａｔｒｏｎおよびＶａｒｉａｎ Ｃｌｉｎａｃを用いてよく知られた標準の技術に従って投与される。]
[0129] 外部放射線の供与源および患者内への進入位置の間の距離は、標的細胞の死滅と副作用の最小化との間で許容可能な釣合いを示す、いかなる距離であることができる。一般的に、外部放射線の供与源は、患者内に侵入の位置から、７０〜１００ｃｍの間である。]
[0130] 密封小線源治療は、通常、患者の線源を配置することによって実行される。一般的に、放射線源は、治療されている組織から、約０〜３ｃｍで配置される。既知の技術は、間質、内腔および表面密封小線源治療を含む。放射性シードは、永久的または一時的に埋め込むことができる。永続的な体内埋め込みで用いられたいくつかの典型的な放射性原子は、ヨウ素−１２５およびラドンがある。一時的な体内埋め込みで用いられたいくつかの典型的な放射性原子は、ラジウム、セシウム１３７およびイリジウム−１９２がある。密封小線源治療で用いられたいくつかの更なる放射性原子は、アメリシウム−２４１および金−１９８がある。]
[0131] 照射の量は、従来技術で知られるように非常に多い要素に依存する。このような要素は、治療されている器官、偶然に悪影響を及ぼすかもしれない照射経路における健康な器官、放射線療法に関する患者の許容差および治療を必要とする体の領域を含む。この量は、一般的には１〜１００Ｇｙの間、特に２〜８０Ｇｙの間である。報告された幾つかの量は、脊髄に対して３５Ｇｙ、腎臓に対して１５Ｇｙ、肝臓に対して２０Ｇｙおよび前立腺に対して６５〜８０Ｇｙがある。しかしながら、本発明がいかなる特定の用量に限定されないことを強調すべきである。この量は、前述の要素を含む所定の状況で特定の要素に従って処理する医師によって測定されるだろう。]
[0132] 密封小線源治療用の放射線量は、外部の線治療用で上述したものと同様であることができる。外部の線照射治療の量を決定するために上述の要素に加えて、使用される放射性原子の性質をまた、密封小線源治療の用量を決定する際に考慮する。]
[0133] 組成物、投与および投与量
本発明の方法ために、ヒト化抗体は、従来技術、特にタンパク質活性薬剤に関して知られるような、医薬品組成物を形成するための一つ以上の薬学的に許容可能なキャリア、安定剤または添加剤（賦形剤）を用いて従来の方法で調製することができる。（複数の）キャリアは、組成物の他の成分と互換性を持ち、それの受容者に有害でないという意味で“許容可能”である。適切なキャリアは、一般的に生理食塩水または、グリセリンまたはプロピレングリコールのようなエタノールポリオールがある。]
[0134] 抗体は中性または塩形態として調製することができる。薬学的に許容可能な塩類は、酸添加塩（遊離アミノ基が形成）および塩酸もしくはリン酸のような無機酸または、酢酸、シュウ酸、酒石酸およびマレイン酸のような有機酸で形成されるものを含む。遊離カルボキシル基が形成される塩類はまた、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウムまたは水酸化第二鉄のような無機塩基および、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジンおよびプロカインに基づく有機塩基から誘導することができる。]
[0135] この組成物は静脈内、筋肉内、皮下または腹膜内の投与で適切に調製することができ、抗体の滅菌の水溶液を好都合なことに含み、好ましくは受容者の血液と等張である。このような製剤を、塩化ナトリウム、グリシンなどのような生理的に互換性を持つ物質を含む水内で固形の活性成分を溶解し、水溶液を生産する生理学的条件と互換性を持つ緩衝されたｐＨとし、前記溶液を滅菌することによって一般的に調製される。これらは、単位または複数投与用コンテナ、例えば密封アンプルまたはバイアルで調製することができる。]
[0136] この組成物は、例えばポリエチレングリコールのような安定剤、タンパク質、糖類（例えばトレハロース）、アミノ酸、無機酸およびそれらの混合剤を混合することができる。安定剤を、適当な濃度およびｐＨで水溶液内に用いる。水溶液のｐＨを、５．０〜９．０の範囲、好ましくは６−８の範囲に調整する。抗体を調製することにおいて、抗吸着剤を用いることができる。他の適切な賦形剤は、アスコルビン酸のような抗酸化剤を一般的に含むことができる。]
[0137] この組成物は、複合体にポリマーの使用によって達成またはタンパク質を吸収することができる徐放性製剤として調製することができる。徐放製剤用で適当なポリマーは、例えばポリエステル、ポリアミノ酸、ポリビニル、ピロリドン、エチレン酢酸ビニルおよびメチルセルロースがある。徐放性のために他の可能な方法は、ポリエステル類、ポリアミノ酸、ヒドロゲル、ポリ（乳酸）またはエチレンビニル酢酸塩コポリマーのような重合物質の粒子に、抗体を混合することである。あるいは、これらの薬剤を重合粒子に混合する代わりに、調製したマイクロカプセル内にこれらの原料を混入することが可能であり、例えばコアセルベーション技術、ヒドロキシメチルセルロースもしくはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ（メタクリル酸メチル）のそれぞれのマイクロカプセルの界面重合法、例えばリポソーム、アルブミンミクロスフィア、ミクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノカプセルのコロイド薬物送達系、または、マクロエマルジョンである。]
[0138] 経口薬製剤が望まれるとき、組成物はキャリア、例えばラクトース、スクロース、スターチ、タルク・ステアリン酸マグネシウム、結晶セルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、グリセリン、アルギン酸ナトリウムまたはアラビアゴムと組み合わせることができる。]
[0139] 本発明のヒト化抗体を、好ましくは非経口的、一般に静脈内注入によって投与する。投与はまた、腹腔内、経口、皮下または筋肉内の経路によることができる。抗体は、通常患者体重の約０．１〜約２０ｍｇ／ｋｇ、一般に約０．５〜約１０ｍｇ／ｋｇおよび多くは約１〜約５ｍｇ／ｋｇの範囲で投与される。この点に関して、循環半減期の少なくとも１２時間、好ましくは少なくとも４日、より好ましくは最高２１日を有する抗体を用いることが好ましい。キメラおよびヒト化の抗体は、それぞれ、最高４日および最高１４〜２１日の循環の半減期を有すると考えられる。いくつかの場合において、多い初回負荷量、その後、治療期間にわたる周期的（例えば、毎週）な維持量を投与することは、有利であることができる。抗体をまた、徐放送達系、能動輸送態および、持続注入で他の既知の送達系によって送達することができる。投与する処方薬は、その薬物動態学に基づいて特定の抗体の所望の循環濃度を提供するために変化することができる。したがって、用量を、治療薬の所望の循環濃度を維持するために算出する。]
[0140] 一般的に、有効量は、治療上の組合せの活性、対象の状態および治療される対象の体重または表面積で決定されるだろう。服用量の大きさおよび投与処方はまた、特定の対象において、本発明の組合せで各々の薬剤の投与を伴って起こるいずれかの有害な副作用の影響の、存在、性質および範囲で決定されるだろう。投与される治療組成物の有効量を決定するとき、医師は、なかでも、循環する血漿濃度、毒性および疾患の進行を評価する必要がある。]
[0141] 本発明の組合せ方法の様々な実施態様において、ヒト化抗体および化学療法剤は多くの治療計画のいずれかに従って投与することができ、「投薬計画」および「投与処方」ともいい、投与の頻度および各々の活性の薬剤の投与の順序を参照する。例えば、ヒト化抗体および化学療法剤は実質的に同時、すなわち同時に、例えば混合性剤形または別々の剤形を用いて、投与することができる。投与のこの形態はまた、「同時」投与ということができる。併用投与は、同じ一般的な時間内、例えば必ずしも同時でなく例えば同日に、活性薬剤の投与をいう。例えば、１つの活性薬剤は食物とともに投与を必要とすることができる一方、その他は半空腹状態の投与を必要とする。交互投与は、特定の時間の間、例えば数日または１週の工程にわたって１つの薬剤を投与し、その後、次の同一の期間にその他の薬剤を投与し、それから、一つ以上の周期のパターンを繰り返すことを含む。経時的または連続的な投与は、第一の時間の間、一つ以上の服用量を用いて、１つの薬剤を投与して、その後、第二の時間の間、一つ以上の服用量を用いて他の薬剤の投与することを含む。重複計画をまた使用することができ、それは治療期間にわたる異なる日、必ずしも規則的な順序によるわけではない活性薬剤の投与を含む。これらの一般的なガイドライン上の変更はまた、用いられる薬剤および対象の状態により、使用することができる。]
[0142] いくつかの特定の組合せにおいて、投与の特定の順序、例えばその他より前に１つの薬剤を用いることは、有利であることができる。例えば、本願明細書（図５）に説明したように、ダカルバジンはヒト化抗体の２４時間後に加えられるとき以外に同時に与えるとき、抗体の活性に悪影響を与える。] 図５
[0143] ところで本発明を一般に説明したように、同様なことは、実例として提供し、本発明を限定することを目的としない以下の実施例を参照することにより容易に理解されるだろう。]
[0144] 実施例１生体外の機能的な分析
機能的な分析は、培養組織におけるマウスおよびヒトのリンパ球の生存性を改善するために、ｈＢＡＴ−１の性能に基づく。この実施例において、リンパ球単独の改良された生存性にｈＢＡＴ−１および化学療法薬と組み合わせる効果を、細胞生存の％差または用量反応曲線下面積（ＡＵＣを差％×μｇ／ｍＬで表す）によって評価および示した。化学療法剤を、示した濃度で、ｈＢＡＴ−１治療の２４時間後または併用で適用した。機能的な分析法で試験される化学療法剤は、５ＦＵ（図１，２および７）、ＳＮ−３８、イリノテカンの活性の誘導体（図３および４）、シスプラチン、オキサリプラチン、タキソール（パクリタキセル）およびダカルバジン（図５および７）、シタラビン、シクロホスファミドおよびドキソルビシン（図６）がある。] 図１ 図３ 図５ 図６
[0145] その結果は、特定の薬剤（例えば５ＦＵ、シスプラチン、オキサリプラチン、パクリタキセルおよびシタラビン）がマウスのリンパ球におけるｈＢＡＴ−１の活性に悪影響を与えないことを示す。さらに、（シスプラチン）と併用、または、（５ＦＵおよびパクリタキセル）とｈＢＡＴ−１を連続して与えるとき、相乗効果を、活性値（細胞生存およびＡＵＣの％差）の２０％〜３０％向上によって示されることで観測する。化学療法剤単独の使用は、この機能的な分析におけるリンパ球細胞生存を増加する際の活性が全くない（図１Ｃ）。相乗作用の結果は単離されたヒトＣＤ４＋リンパ球によって得られ、ｈＢＡＴと組み合わせて５ＦＵまたはシスプラチンの経時的な治療は、抗体単独の活性より２倍高い活性（細胞生存の％差）を生じることを示した（図７）。その結果はまた、一定の化学療法剤（例えばＳＮ−３８；シクロホスファミド）がマウスのリンパ球培養でｈＢＡＴ−１と組み合わせて与えられるとき、それらが細胞生存を改善しないので、ヒト化ＢＡＴ抗体との組合せで使用することは適切でない可能性があることを示唆する。さらに、一定の化学療法剤（例えばダカルバジン）は経時的な投与計画で用いられるときのみ適切である可能性がある（図３〜５）。] 図１Ｃ 図３ 図４ 図５ 図７
[0146] 実施例２ 結直腸癌腫瘍に対する複合治療
結腸直腸癌腫腫瘍（ＣＴ２６腫瘍）を、ＣＴ２６細胞（１０６細胞／マウス（ｎ＝６））のＳ．Ｃ．注射によって誘導した。注射の日を本願明細書で０日という。５−ＦＵ２０ｍｇ／ｋｇを、６〜９、１５〜１７、２２〜２４および２９〜３１、３６〜３８および４３〜４５日にＬＰで投与した。ｈＢＡＴ−１、１０ｍｇ／マウスを、１０、１８、２５、３２および３９日にＩ．Ｖ．で投与した（図８〜１０）。完全寛解後の再発の場合（複合治療群のみで観察）には、７３〜７４、７７〜８０、８５〜８７、９２〜９３日に、５ＦＵ２０ｍｇ／ｋｇでさらに治療し、ｈＢＡＴ−１を、８１および８８日に１０ｍｇ／マウスをＬＶ投与した。] 図１０ 図８ 図９
[0147] 治療の単一サイクル後の腫瘍大きさの探究研究において、腫瘍体積を、腫瘍接種後４〜１６日で一日おきに測定した。その結果は、５ＦＵとの併用療法が５ＦＵまたはｈＢＡＴ−１単独のいずれかでの治療法を超える利点があることを示す（図８）。] 図８
[0148] ３つの交互の周期治療後に腫瘍の大きさの追跡研究において、腫瘍体積を、４〜２８日に一日おきで測定した。その結果は、５ＦＵとｈＢＡＴ−１抗体の複合治療が５ＦＵ単一療法を超える利点があるだけではなく、活性の増加は相乗作用があることを示す（図９）。] 図９
[0149] 全体的な生存性の追跡研究において、生存性割合を、２８日以降を観察して、図１０に示す。その結果は、複合治療で治療されるマウスにおいて、生存性のパーセントはｈＢＡＴ−１または５ＦＵ単一療法のいずれかで治療されるマウスより非常に高く、約１７％のマウスの耐久完全寛解に導くことを明らかに示す。] 図１０
[0150] 実施例３黒色腫に対する複合治療
マウス（ｎ＝７）に、５×１０５細胞／マウスでＢ１６メラノーマ細胞を皮下接種した。注射の日を本願明細書で０日という。５−ＦＵを、１〜４および７〜８日に５０ｍｇ／ｋｇで、腹腔内に投与した。複合治療群において、ｈＢＡＴ−１の１０ｍｇ／マウスの一回量を、１０日に静脈内に注入した。]
[0151] 生存性割合を、８日に開始で観察した。複合治療で治療されるマウスにおいて、生存性のパーセントは、５ＦＵの高い投与量で治療されるマウスより非常に高かった（図１１）。別に述べたように、組合せ治療は、ヒト化抗体を服用量制限毒性（ＤＬＴ）濃度（５０ｍｇ／ｋｇ／日）で５ＦＵの９日の周期後投与した経時的な投与計画を用いて、実験的な黒色腫モデルのマウスにおいて改善された生存性を生じた。その結果は、複合治療が５−ＦＵのＤＬＴ濃度に許容度を改善することを明らかに示唆する。] 図１１
[0152] 実施例４イリノテカン（１）を用いての複合治療
結腸直腸癌腫腫瘍（ＣＴ２６腫瘍）を、ＣＴ２６細胞、１０６細胞／マウス（ｎ＝６）のＳ．Ｃ．注射によって誘導した。注射の日を本願明細書で０日という。イリノテカン１００ｍｇ／ｋｇを、７および１５日にＬＰで投与した。ｈＢＡＴ−１、１０ｍｇ／マウスを、１０日にＬＶで投与した（図１２）。治療の単一サイクル後の腫瘍大きさの探究研究において、腫瘍体積を、４〜１８日に毎日測定した。その結果は、イリノテカンとｈＢＡＴ−１抗体の複合治療がイリノテカンの単一療法と同じく効果的であるが、ｈＢＡＴ−１単一療法より効果的でないことを示す（図１２）。] 図１２
[0153] 実施例５イリノテカン（２）を用いての複合治療
結腸直腸癌腫腫瘍（ＣＴ２６腫瘍）を、ＣＴ２６細胞、１０６細胞／マウス（ｎ＝６）のＳ．Ｃ．注射によって誘導した。注射の日を本願明細書で０日という。イリノテカン１００ｍｇ／ｋｇを、７および１５日にＬＰで投与した。ｈＢＡＴ−１（１０ｍｇ／マウス）を、１０日にＬＶで投与した（図１３）。] 図１３
[0154] 生存性割合は、１６日に開始して観察した。その結果は、複合治療で治療されるマウスにおいて、生存性のパーセントは、イリノテカン単一療法で治療されるマウスのものと同等であるが、ｈＢＡＴ−１単一療法で治療されるマウスより低いことを示す。]
[0155] 実施例６オキサリプラチンを用いての複合治療
結腸直腸癌腫腫瘍（ＣＴ２６腫瘍）を、ＣＴ２６細胞、１０６細胞／マウス（ｎ＝６）のＳ．Ｃ．注射によって誘導した。注射の日を本願明細書で０日という。オキサリプラチン１ｍｇ／ｋｇを、４、７〜１０、１４〜１７、２２〜２４および２９〜３１日にＬＰで投与した。ｈＢＡＴ−１、１０ｍｇ／マウスを、１１、１８、２５および３２日にＬＶで投与した（図１４〜１５）。] 図１４ 図１５
[0156] 腫瘍大きさの探究研究において、腫瘍体積を、腫瘍接種後４〜２３日に一日おきで測定した。その結果は、オキサリプラチンとの併用療法がオキサリプラチン単独での治療法を超える利点があることを示す（図１４）。] 図１４
[0157] 全体的な生存性についての探究において、生存性割合を、１５日に開始して観察した。その結果は、複合治療で治療されるマウスにおいて、生存性のパーセントがオキサリプラチン単一療法で治療されるマウスより非常に高く、マウスの約２０％の耐久完全寛解を導くことを、明らかに示す（図１５）。] 図１５
[0158] 結腸直腸癌腫腫瘍（ＣＴ２６腫瘍）は、ｈＢＡＴ−１およびオキサリプラチン複合治療によって、２または５ヵ月間治療されたマウスにおけるＣＴ２６細胞、１０６細胞／マウスのＳ．Ｃ．注射によって再誘導した（ｎ＝３）。結腸直腸癌腫腫瘍を、同様の年齢（ｎ＝６）で、対照の実験に使われていないマウスで新しく誘導した。注射の日を本願明細書で０日という（図１６）。ＣＲＣの再誘導（再接種）の前に、治療経験があるマウスを、特定のＥＬＩＳＡによってｈＢＡＴ−１の血清濃度を完全な除去で評価した。] 図１６
[0159] 腫瘍大きさの探究研究において、腫瘍体積を、一日おきに測定して、腫瘍接種後４〜２３日に探究として示す。その結果は、ｈＢＡＴ−１およびオキサリプラチン複合治療によってあらかじめ治療されるマウスにおいて、腫瘍を２月の探究の間に全く観察されない一方、対照群において、腫瘍は全てのマウスにおいて数日以内に発現した（図１６Ａ）。] 図１６Ａ
[0160] 全体的な生存性の探究研究において、生存性割合を、腫瘍再接種後２１日に開始して観察した。その結果は、腫瘍（ＣＲＣ）を伴って新しく導入したマウスが３５日以内に死亡する一方、ｈＢＡＴ−１およびオキサリプラチンの複合治療によってあらかじめ治療されるマウスは、研究探究の７２日を超える間、腫瘍成長、腫瘍再発および死亡から予防することを明らかに示す（図１６Ｂ）。] 図１６Ｂ
[0161] 胸部腺癌腫瘍（４Ｔ１腫瘍）はｈＢＡＴおよびオキサリプラチンによってあらかじめ治療されるマウスにおいて４Ｔ１細胞、１０６細胞／マウスのＳ．Ｃ．注射によって再誘導し、約３ヵ月の間のＣＲＣの再接種に対して予防する（マウスは図１６に記載、ｎ＝２）。これらのマウスにおいて、腫瘍は、第１ＣＲＣおよび第２ＣＲＣの注射部位（再接種ＣＲＣ腫瘍）のものに比べて、異なる部位でＳ．Ｃ．注射した。胸部腺癌腫瘍をまた、同様の年齢（ｎ＝６）で、実験に使われていないマウスに導入した。注射の日を本願明細書で０日という（図１７）。] 図１６ 図１７
[0162] 腫瘍大きさの探究研究において、腫瘍体積を、一日おきに測定して、腫瘍接種後３〜２１日からを示す。その結果は、胸部腺癌腫瘍が両方のマウス群で向上したことを示す（図１７Ａ）。これらの結果は、ｈＢＡＴ−１およびオキサリプラチンの複合治療後の結腸直腸癌腫に対して十分な予防を獲得したマウス（図１６Ａ）が乳癌（図１７Ａ）に対するほど予防しないことを明らかに示す。] 図１６Ａ 図１７Ａ
[0163] 全体的な生存性の探究研究において、生存性割合を、腫瘍再接種後２１日に開始で観察した。その結果は、両群のマウスが、乳癌から２８〜３５日以内に死亡し、ＣＲＣ再発（再摂取）に対して長期間保護を呈するマウスが、完全には異なる種類の腫瘍、例えば乳癌から十分に予防することを示唆することを明らかに示す。あらかじめ処理したマウスの全てを、本発明の抗体の循環する血清濃度の完全な除去で試験したので、結腸直腸癌腫に対して得られた腫瘍特異性の予防が活性治療の結果ではなく、むしろ本発明の抗体およびオキサリプラチンで先に治療後誘導される免疫記憶反応の結果であるようである。]
[0164] 全体的に、本発明の抗体および特定の化学療法剤の複合治療、例えば５ＦＵまたはオキサリプラチンは、交互計画に従って投与されるとき、腫瘍成長の減少および担癌マウスの生存性の向上によって評価したように、向上した抗腫瘍活性を生じる。予想外に、複合治療群のマウスは到達された恒久的完全寛解、オキサリプラチンの場合には特定の腫瘍（ＣＲＣ）との再接種によって評価したように、すでに獲得した腫瘍再発に対して記憶領域保護に到達した。]
[0165] 実施例７ ヒト作用因子／記憶Ｔ細胞でのＣＴ−０１１の効果
ｈＢＡＴ１（ＣＴ−０１１）の活性を、ヒトリンパ球の生存率に基づいて、分析法で評価した。作用因子／記憶ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ＋および、実験に使われていないＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ−リンパ球を、ｈＢＡＴ １μｇ／ｍＬによって処理して、その後７２および９６時間培養した。その結果を、細胞生存における％差として示す（図１８）。その結果は、ＣＴ−０１１が、ヒト作用因子／記憶ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ＋リンパ球の生存性を向上する十分な効果を有するが、実験に使われていないＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ−リンパ球のものは有しないことを、明らかに示す。記憶部前駆細胞の生存率を向上する際のＣＴ−０１１の証明した活性は、ＣＴ−０１１が腫瘍再発に対して免疫記憶を誘導する活性を有することを証明する生体内の結果と整合している。] 図１８
[0166] 実施例８ヒト化モノクローナル抗体ＣＴ−０１１の第１相臨床試験
導入
この研究の目的は、服用量制限毒性（ＤＬＴ）を評価すること、最大耐量（ＭＴＤ）を決定することおよび高度な血液癌の患者にＣＴ−０１１を投与した一回の薬物動態学を研究することである。研究の十分な説明が、Berger et al. Clin. Cancer Res. 2008;14(10) May 15, 2008で提供される。]
[0167] 患者および方法
研究のための許可基準は、登録患者が以下の血液癌の１つを有しなければならないことが必要であった：急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、またはそれらの疾患の進行期および、次の化学療法および／または幹細胞移植（ＳＣＴ）で多発性骨髄腫（ＭＭ）。患者はそれらがＢｅｒｇｅｒ等に記載したような基準を満たしたと仮定するならば、この研究で適格だった。]
[0168] 重要なことに、その基準は下記を含む：幹細胞移植（ＳＣＴ）からの少なくとも４週またはドナーリンパ球持続注入（ＤＬＩ）から１週；寿命＞３ヵ月；免疫の抑制効果を伴う治療の効果を受けるまたは回復しないいずれかの患者、または自己免疫不全を患った患者は除外した。これに対する例外はＡＭＬ患者のヒドロキシ尿素治療であり、それは進行することができた。併用する制癌治療（化学療法および免疫療法）の使用を禁止し、それに応じてＣＴ−０１１投与前に少なくとも４週間停止することになった。]
[0169] その研究は、合計１７人の患者を記録した。最も低い服用濃度（０．２ｍｇ／ｋｇ）で記録した１人の患者は、合計１８の投与治療で例外的治療したように、比較的高い服用濃度（３．０ｍｇ／ｋｇ）で第１の投与の５ヵ月後に再登録した。ＣＴ−０１１の総量を、計画的な投薬（ｍｇ／ｋｇ基準）および体重に基づいて決定した。持続注入を、５０ｍＬ／時間から１００ｍＬ／時間まで率を増加させる段階的方法で実行して、全ての患者は疼痛寛解薬物（パラセタモール）、コルチコステロイド（ヒドロコルチゾン１００ｍｇ）および抗ヒスタミン剤（フェネルガン）からなる持続注入の前に前投薬を受けた。開始服用量は０．２ｍｇ／ｋｇであり、それはヒト−当量−服用量（ＨＥＤ）基準でヒト以外の霊長類およびマウスで行われる毒物学研究において試験される最も高い服用量より、数１０倍低かった。他の服用量濃度は、０．６ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇおよび６ｍｇ／ｋｇであった。１つの服用濃度から次への段階的増加は、結局、先の濃度で全ての患者を、その服用量投与後に少なくとも７日間評価した後に可能であった。]
[0170] 毒性を、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＮＣＩ）Ｃｏｍｍｏｎ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ Ｃｒｉｔｅｒｉａ（ＣＴＣＡＥＶ２）で、その強度（すなわち、軽度、適度、重度）によって評価した。ＤＬＴを、一人以上の患者でいずれかのグレード３もしくは４の毒性、または少なくとも２／３もしくは３／６の患者におけるいずれかのグレード２の毒性を誘導する服用量として規定した。ＣＴ−０１１に関連があると判断されない有害事象を、これらの服用量の段階的増加およびＭＴＤ規則に関する毒性として考慮しなかった。]
[0171] 薬剤投与の次に、患者は、２４時間、４８時間ならびに７、１４および２１日に、有害事象ならびに臨床的および検査上の反応を含む安全性を観察した。]
[0172] サンプル採集、臨床効果を評価するために用いられるパラメーター、薬物動態学的分析、免疫系活性および統計分析はBerger et al,2008に記載されたものである。]
[0173] 結果
登録患者（ｎ＝１７）の主な特徴を、表１に記載する。患者００３は、０．２ｍｇ／ｋｇで最初に治療して、繰り返し例外的治療を依頼して再度３ｍｇ／ｋｇで治療した。第１および第２の治療の間に５ヵ月の間隔によって、異なる治療を別々の個体で分析した。従って、分析で用いたＣＴ−０１１投与の数は１８であった。]
[0174] ]
[0175] 略語：ＡＬＣＬ、急性リンパ球細胞リンパ腫、ＣＭＭＬ、慢性骨髄単球性白血病、ＤＬＢＣＬ、広範性の大きいＢ細胞リンパ腫、ＦＡＢ分類−フランス人、アメリカ人およびイギリス人：ＦＡＢ分類に従うＭ１、Ｍ２、Ｍ４、ＮＲ：非関連、ＳＣＴ：幹細胞移植。]
[0176] ＤＬＴを、この研究で達成しなかった。ＣＴ−０１１が、全く治療関連の毒性なしで安全および十分に通用するとわかった。一回量のＭＴＤを全く、この研究で分からなかった。]
[0177] 研究の間、患者の６１％（１８のうちの１１）は、有害事象（ＡＥ）を報告し、観察される最も頻繁なＡＥは下痢であったが、ＣＴ−０１１治療と関連しないことを結論とした。]
[0178] ４つの重篤な有害事象が生じ、その全ては死に至り、ＡＭＬ患者で発生した。臨床分析はこれらの患者全員が急性耐性白血病(fulminate resistant leukemia）で死亡し、これらの死亡のいずれも研究薬に関連があるとは考慮しなかったと結論した。]
[0179] 研究の２１日間にわたって、ＡＭＬ患者の末梢血液の芽細胞の平均割合の変化は、１人のＡＭＬ患者（５０％から５％への末梢芽細胞の減少）を除いて全く観察されなかった。加えて、２人のＣＬＬ患者、４人のＮＨＬ患者および１人の多発性骨髄腫患者において、２１日間の研究で、疾患パラメーターは不変であった。]
[0180] ２１日で全ての患者（ｎ＝１８）の累積的な生存性は、４８％〜９０％の信頼区間９５％で、７６％あった。服用量群にわたる平均生存時間の差を全く示さなかった。]
[0181] 患者を、２１日間以上の研究で生存性を追跡調査した。研究の平均生存時間は２５±２７週であり、１．７から７７週以上まで変動した。この追跡調査は、６人の患者が平均少なくとも６０週を延長した生存性を伴なう治療への明らかな反応を示したことを示唆した。６人の「応答者」の患者を、表２に示す。第４の服用濃度３．０ｍｇ／ｋｇを受けた患者＃０１５に、１つの完全寛解があった。この患者は、横隔膜の上下部に結節を含む段階ＩＩＩの濾胞性リンパ腫と診断された。患者は、疾患のために全く従来の治療を受けてなかった。ＣＴ−０１１治療後１０ヵ月定期点検の間に実行されるＣＴスキャンにおいて、腫瘍腫瘤の完全な除去を観察した。興味深いことに、患者は、ＣＴ−０１１治療および１０ヵ月の検査の間の経過期間に、全く他の治療を受けてなかった。患者は、ＣＴ−０１１治療に続いて、６８週、継続した寛解を証明した。１つの最小の反応を、０．２および３ｍｇ／ｋｇで、ＣＴ−０１１を受けるＡＭＬ患者で観察した。患者は、ＣＴ−０１１を受けた６１週後に改善した。４人の患者は、安定した疾患を示した：０．６ｍｇ／ｋｇでＣＴ−０１１を受けるＨＤを伴なう一人は、３５週の間、安定した疾患であった。２人の０．６ｍｇ／ｋｇおよび１．５ｍｇ／ｋｇで抗体を受けるＣＬＬを伴なう患者は、それぞれ３６週および７８週以上の間安定していた。６．０ｍｇ／ｋｇでＣＴ−０１１を受けるＭＭ患者は、６０週以上の間、安定した疾患であった。]
[0182] ＣＲ＝完全寛解；ＳＤ＝安定した疾患；ＭＲ＝最小の反応。]
[0183] 考察および結論
２１日で全ての患者の累積的な生存性は７６％であり、研究の２１日間以上の探究で２５週の平均生存性がみられた。大部分の患者がそれらの疾患の進行期であったと仮定すると、６人の患者が、生存平均６０週を延長した臨床利点を示すことを、驚くべきことであって予想外に発見した。]
[0184] ＣＴ−０１１の中央値ｔ１／２は、ヒトにおける他のモノクローナル抗体との観測と整合していて、２１７時間から４１０時間（９〜１７日）まで変化した。興味深いことに、明らかな臨床効果を伴う６人の患者に対する中央値ｔ１／２（表２）は、残りの患者のものよりやや高かった。これらの６人の患者の平均６０週での反応の持続期間および大きな半減期４１０時間を有する抗体の薬物動態学を考慮すると、数人の患者において、腫瘍に特有の免疫記憶は誘導されて、抗体が血液から除かれたずっと後に、耐久性のある抗腫瘍免疫応答に導くのが明らかである。]
実施例

[0185] 特定の実施態様の上述の説明は、本発明の一般的な性質をとても十分に現し、その他は、現在の知識を適用することによって、このような特定の実施態様を、過度の実験することなくおよび上位概念から逸脱することなく、様々な適用で容易に、修飾および／または適応することができ、従って、このような適用および修飾は、開示した実施態様の意味および均等の範囲内で理解すべきであり、それを意図する。本願明細書に使用される表現または用語は明細書の目的とするものであり、制限されないことを理解すべきである。様々な開示された機能を実行するための方法、原料および手段は、本発明から逸脱することなく、種々の他の形態を取り入れることができる。]

权利要求:

請求項1
腫瘍を処理する方法において、（ｉ）必要とする対象に、ヒト化モノクローナル抗体またはそれの断片の有効量を投与する工程であって、前記抗体またはその断片が、受容体ヒト免疫グロブリンまたはその修飾物から、マウスのモノクローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）およびフレームワーク領域（ＦＲ）の、少なくとも一つの相補性決定領域を有するものを投与する工程と；（ｉｉ）前記対象に少なくとも一つの化学療法剤の有効量を投与する工程と；を含みそれによって、腫瘍を処理する方法。
請求項2
前記ヒト化抗体が、ＢＡＴＲＫＡ（配列番号：１５），ＢＡＴＲＫＢ（配列番号：１６），ＢＡＴＲＫＣ（配列番号：１７），およびＢＡＴＲＫＤ（配列番号：１８）からなる群から選択される軽鎖可変領域と、Ａ（配列番号：２０），ＢＡＴＲＨＢ（配列番号：２１），ＢＡＴＲＨＣ（配列番号：２２），ＢＡＴＲＨＤ（配列番号：２３）およびＢＡＴＲＨＥ（配列番号：２４）からなる群から選択される重鎖可変領域とを含む請求項１に記載の方法。
請求項3
前記ヒト化抗体が、ＢＡＴＲＨＡ／ＢＡＴＲＫＡ（配列番号：２０／配列番号：１５），ＢＡＴＲＨＢ／ＢＡＴＲＫＡ（配列番号：２１／配列番号：１５），ＢＡＴＲＨＢ／ＢＡＴＲＫＢ（配列番号：２１／配列番号：１６），ＢＡＴＲＨＣ／ＢＡＴＲＫＢ（配列番号：２２／配列番号：１６），ＢＡＴＲＨＢ／ＢＡＴＲＫＤ（配列番号：２１／配列番号：１８），およびＢＡＴＲＨＣ／ＢＡＴＲＫＤ（配列番号：２２／配列番号：１８）からなる群から選択される可変領域を含む請求項１に記載の方法。
請求項4
前記ヒト化モノクローナルが、ＢＡＴＲＨＣ／ＢＡＴＲＫＤ（配列番号：２２／配列番号：１８）に対応する可変領域を有する請求項３に記載の方法。
請求項5
前記ヒト化抗体の断片が、Ｆｖ，Ｆ（ａｂ’），Ｆ（ａｂ’）２および単鎖抗体からなる群から選択される請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
請求項6
前記ヒト化抗体またはその断片が、ｍＢＡＴ−１の抗腫瘍活性を保持する請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
請求項7
前記少なくとも一つの化学療法剤が、代謝拮抗剤、白金に基づく薬剤、有糸分裂阻害剤、アントラサイクリン系抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤、抗血管形成剤およびそれらの組合せからなる群から選択される請求項１に記載の方法。
請求項8
前記少なくとも一つの化学療法剤が、５−フルオロウラシル、ウラシルマスタード、ウラシル、カペシタビン、６−メルカプトプリン、メトトレキセート、ゲムシタビン、シタラビン、フルダラビンおよびペメトレキセドからなる群から選択される代謝拮抗剤；シスプラチン、カルボプラチンおよびオキサリプラチンからなる群から選択される白金に基づく薬剤；パクリタキセル、ドセタキセル、エトポシド、ビンブラスチン、ビンクリスチンおよびビノレルビンからなる群から選択される有糸分裂阻害剤；ベバシズマブ、ドーパミン、テトラチオモリブデート、ＶＥＧＦの抗血管形成異型からなる群から選択される抗血管形成薬剤；ならびにそれらの組合せからなる群から選択される請求項７に記載の方法。
請求項9
前記少なくとも一つの化学療法剤が、５−フルオロウラシル、シタラビン、オキサリプラチン、パクリタキセルおよびそれらの組合せからなる群から選択される請求項８に記載の方法。
請求項10
前記少なくとも一つの化学療法剤が、トポイソメラーゼＩ阻害剤およびアルキル化剤からなる群から選択される薬剤以外である請求項１に記載の方法。
請求項11
前記ヒト化抗体および前記少なくとも一つの化学療法剤の投与を、実質的に同時、並行、交替、順次または連続して実行する請求項１に記載の方法。
請求項12
前記ヒト化抗体および前記少なくとも一つの化学療法剤を、重複計画に従って投与する請求項１に記載の方法。
請求項13
前記ヒト化抗体の投与を、前記少なくとも一つの化学療法剤の最初の投与の前に実行する請求項１に記載の方法。
請求項14
前記ヒト化抗体および前記少なくとも一つの化学療法剤のいずれか一方または両方の投与を、静脈内、経口、腹腔内、皮下、単離された四肢潅流、器官への持続注入およびそれらの組合せからなる群から選択される経路によって実行する請求項１に記載の方法。
請求項15
請求項１に記載の方法が、放射線で前記対象を処理することを更に含む方法。
請求項16
請求項１に記載の方法が、腫瘍成長率、腫瘍体積、転移の数、腫瘍再発およびそれらの組合せからなる群から選択される少なくとも一つのパラメーターを評価することを更に含む方法。
請求項17
前記腫瘍が、結腸直腸癌腫；肺癌腫；乳癌；黒色腫；卵巣悪性腫瘍；子宮頚癌、膵臓癌；多発性骨髄腫；腎細胞癌；非ホジキンリンパ腫；ホジキン病；マントル急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）；慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）；急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）および慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）からなる群から選択される請求項１に記載の方法。
請求項18
少なくとも一つの化学療法剤に対する許容性を改善する方法において、必要とする対象に、ヒト化モノクローナル抗体またはその断片の有効量を投与する工程を含み、前記抗体またはその断片が受容体ヒト免疫グロブリンまたはその修飾物から、マウスのモノクローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）およびフレームワーク領域（ＦＲ）の、少なくとも一つの相補性決定領域を有し、前記対象は、少なくとも一つの化学療法剤による化学療法を受けており；それによって、前記少なくとも一つの化学療法剤に対する許容性を改善する方法。
請求項19
前記ヒト化抗体が、ＢＡＴＲＫＡ（配列番号：１５），ＢＡＴＲＫＢ（配列番号：１６），ＢＡＴＲＫＣ（配列番号：１７），およびＢＡＴＲＫＤ（配列番号：１８）からなる群から選択される軽鎖可変領域と、Ａ（配列番号：２０），ＢＡＴＲＨＢ（配列番号：２１），ＢＡＴＲＨＣ（配列番号：２２），ＢＡＴＲＨＤ（配列番号：２３）およびＢＡＴＲＨＥ（配列番号：２４）からなる群から選択される重鎖可変領域とを含む請求項１８に記載の方法。
請求項20
前記ヒト化抗体が、ＢＡＴＲＨＡ／ＢＡＴＲＫＡ（配列番号：２０／配列番号：１５），ＢＡＴＲＨＢ／ＢＡＴＲＫＡ（配列番号：２１／配列番号：１５），ＢＡＴＲＨＢ／ＢＡＴＲＫＢ（配列番号：２１／配列番号：１６），ＢＡＴＲＨＣ／ＢＡＴＲＫＢ（配列番号：２２／配列番号：１６），ＢＡＴＲＨＢ／ＢＡＴＲＫＤ（配列番号：２１／配列番号：１８），およびＢＡＴＲＨＣ／ＢＡＴＲＫＤ（配列番号：２２／配列番号：１８）からなる群から選択される可変領域を含む請求項１８に記載の方法。
請求項21
前記ヒト化モノクローナルが、ＢＡＴＲＨＣ／ＢＡＴＲＫＤ（配列番号：２２／配列番号：１８）に対応する可変領域を有する請求項２０に記載の方法。
請求項22
前記ヒト化抗体の断片がＦｖ，Ｆ（ａｂ’），Ｆ（ａｂ’）２および単鎖抗体からなる群から選択される請求項１８〜２０のいずれかに記載の方法。
請求項23
前記ヒト化抗体またはその断片が、ｍＢＡＴ−１の抗腫瘍活性を保持する請求項１８〜２０のいずれかに記載の方法。
請求項24
前記少なくとも一つの化学療法剤が、代謝拮抗剤、白金に基づく薬剤、有糸分裂阻害剤、アントラサイクリン系抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤、抗血管形成剤およびそれらの組合せからなる群から選択される請求項１８に記載の方法。
請求項25
前記少なくとも一つの化学療法剤が、５−フルオロウラシル、ウラシルマスタード、ウラシル、カペシタビン、６‐メルカプトプリン、メトトレキセート、ゲムシタビン、シタラビン、フルダラビンおよびペメトレキセドからなる群から選択される代謝拮抗剤；シスプラチン、カルボプラチンおよびオキサリプラチンからなる群から選択される白金に基づく薬剤；パクリタキセル、ドセタキセル、エトポシド、ビンブラスチン、ビンクリスチンおよびビノレルビンからなる群から選択される有糸分裂阻害剤；ベバシズマブ、ドーパミンおよびテトラチオモリブデート、ＶＥＧＦの抗血管形成異型からなる群から選択される抗血管形成薬剤；ならびにそれらの組合せからなる群から選択される請求項２４に記載の方法。
請求項26
前記少なくとも一つの化学療法剤が、５−フルオロウラシル、シタラビン、オキサリプラチン、パクリタキセルおよび、それらの組合せからなる群から選択される請求項２５に記載の方法。
請求項27
前記少なくとも一つの化学療法剤が、トポイソメラーゼＩ阻害剤およびアルキル化剤からなる群から選択される薬剤以外である請求項１８に記載の方法。
請求項28
前記ヒト化抗体および前記少なくとも一つの化学療法剤の投与を、実質的に同時、並行、交替、順次または連続して実行する請求項１８に記載の方法。
請求項29
前記ヒト化抗体の投与を、前記少なくとも一つの化学療法剤の最初の投与の前に実行する請求項１８に記載の方法。
請求項30
前記ヒト化抗体および前記少なくとも一つの化学療法剤のいずれか一方または両方の投与を、静脈内、経口、腹腔内、皮下、単離された四肢潅流、器官への持続注入およびそれらの組合せからなる群から選択される経路によって実行する請求項１８に記載の方法。
請求項31
前記化学療法が、結腸直腸癌腫；肺癌腫；乳癌；黒色腫；卵巣悪性腫瘍；子宮頚癌（膵臓癌）；多発性骨髄腫；腎細胞癌；非ホジキンリンパ腫；ホジキン病；マントル急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）；慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）；急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）および慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）からなる群から選択される腫瘍の治療用である請求項１８に記載の方法
請求項32
腫瘍を有する対象の生存性を向上させる方法であって、前記対象は、少なくとも一つの化学療法剤によって処理されており、ヒト化モノクローナル抗体またはその断片の有効量を投与する工程を含み、前記抗体またはその断片が受容体ヒト免疫グロブリンまたはその修飾物から、マウスのモノクローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）およびフレームワーク領域（ＦＲ）の少なくとも一つの相補性決定領域を有し；それによって、前記対象の生存性を向上させる方法。
請求項33
前記ヒト化抗体が、ＢＡＴＲＫＡ（配列番号：１５），ＢＡＴＲＫＢ（配列番号：１６），ＢＡＴＲＫＣ（配列番号：１７），およびＢＡＴＲＫＤ（配列番号：１８）からなる群から選択される軽鎖可変領域と、Ａ（配列番号：２０），ＢＡＴＲＨＢ（配列番号：２１），ＢＡＴＲＨＣ（配列番号：２２），ＢＡＴＲＨＤ（配列番号：２３）およびＢＡＴＲＨＥ（配列番号：２４）からなる群から選択される重鎖可変領域とを含む請求項３２に記載の方法。
請求項34
前記ヒト化抗体が、ＢＡＴＲＨＡ／ＢＡＴＲＫＡ（配列番号：２０／配列番号：１５），ＢＡＴＲＨＢ／ＢＡＴＲＫＡ（配列番号：２１／配列番号：１５），ＢＡＴＲＨＢ／ＢＡＴＲＫＢ（配列番号：２１／配列番号：１６），ＢＡＴＲＨＣ／ＢＡＴＲＫＢ（配列番号：２２／配列番号：１６），ＢＡＴＲＨＢ／ＢＡＴＲＫＤ（配列番号：２１／配列番号：１８），およびＢＡＴＲＨＣ／ＢＡＴＲＫＤ（配列番号：２２／配列番号：１８）からなる群から選択される可変領域を含む請求項３２に記載の方法。
請求項35
前記ヒト化モノクローナルが、ＢＡＴＲＨＣ／ＢＡＴＲＫＤ（配列番号：２２／配列番号：１８）に対応する可変領域を有する請求項３２に記載の方法。
請求項36
前記ヒト化抗体の断片がＦｖ，Ｆ（ａｂ’），Ｆ（ａｂ’）２および単鎖抗体からなる群から選択される請求項３２〜３４のいずれかに記載の方法。
請求項37
前記ヒト化抗体またはその断片が、ｍＢＡＴ−１の抗腫瘍活性を保持する請求項３２〜３４のいずれかに記載の方法。
請求項38
前記少なくとも一つの化学療法剤が、代謝拮抗剤、白金に基づく薬剤、有糸分裂阻害剤、アントラサイクリン系抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤、抗血管形成薬剤および、それらの組合せからなる群から選択される請求項３２に記載の方法。
請求項39
前記少なくとも一つの化学療法剤が、５−フルオロウラシル、ウラシルマスタード、ウラシル、カペシタビン、６‐メルカプトプリン、メトトレキセート、ゲムシタビン、シタラビン、フルダラビンおよびペメトレキセドからなる群から選択される代謝拮抗剤；シスプラチン、カルボプラチンおよびオキサリプラチンからなる群から選択される白金に基づく薬剤；パクリタキセル、ドセタキセル、エトポシド、ビンブラスチン、ビンクリスチンおよびビノレルビンからなる群から選択される有糸分裂阻害剤；ベバシズマブ、ドーパミン、テトラチオモリブデート、ＶＥＧＦの抗血管形成異型からなる群から選択される抗血管形成薬剤；ならびにそれらの組合せからなる群から選択される請求項３８に記載の方法。
請求項40
前記少なくとも一つの化学療法剤が、５−フルオロウラシル、シタラビン、オキサリプラチン、パクリタキセルおよび、それらの組合せからなる群から選択される請求項３９に記載の方法。
請求項41
前記少なくとも一つの化学療法剤が、トポイソメラーゼＩ阻害剤およびアルキル化剤からなる群から選択される薬剤以外である請求項３２に記載の方法。
請求項42
前記ヒト化抗体および少なくとも一つの化学療法薬剤の投与を、実質的に同時、並行、交替、順次または連続して実行する請求項３２に記載の方法。
請求項43
前記ヒト化抗体および前記少なくとも一つの化学療法剤を、重複計画に従って投与する請求項３２に記載の方法。
請求項44
前記ヒト化抗体の投与を、前記少なくとも一つの化学療法剤の最初の投与の前に実行する請求項３２に記載の方法。
請求項45
請求項３２に記載の方法が、放射線で前記対象を処理することを更に含む。
請求項46
前記対象が、結腸直腸癌腫；肺癌腫；乳癌；黒色腫；卵巣悪性腫瘍；子宮頚癌、膵臓癌；多発性骨髄腫；腎細胞癌；非ホジキンリンパ腫；ホジキン病；マントル急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）；慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）；急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）および慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）からなる群から選択される腫瘍を有する請求項３２に記載の方法。
請求項47
腫瘍再発を減少または予防する方法であって、必要とする対象に、ヒト化モノクローナル抗体またはその断片の有効量を投与する工程を含み、前記抗体またはその断片が受容体ヒト免疫グロブリンまたはその修飾物から、マウスのモノクローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）およびフレームワーク領域（ＦＲ）の少なくとも一つの相補性決定領域を有し；それによって、腫瘍再発を減少または予防する方法。
請求項48
前記ヒト化抗体が、ＢＡＴＲＫＡ（配列番号：１５），ＢＡＴＲＫＢ（配列番号：１６），ＢＡＴＲＫＣ（配列番号：１７），およびＢＡＴＲＫＤ（配列番号：１８）からなる群から選択される軽鎖可変領域と、Ａ（配列番号：２０），ＢＡＴＲＨＢ（配列番号：２１），ＢＡＴＲＨＣ（配列番号：２２），ＢＡＴＲＨＤ（配列番号：２３）およびＢＡＴＲＨＥ（配列番号：２４）から選択される重鎖可変領域とを含む請求項４７に記載の方法。
請求項49
前記ヒト化抗体が、ＢＡＴＲＨＡ／ＢＡＴＲＫＡ（配列番号：２０／配列番号：１５），ＢＡＴＲＨＢ／ＢＡＴＲＫＡ（配列番号：２１／配列番号：１５），ＢＡＴＲＨＢ／ＢＡＴＲＫＢ（配列番号：２１／配列番号：１６），ＢＡＴＲＨＣ／ＢＡＴＲＫＢ（配列番号：２２／配列番号：１６），ＢＡＴＲＨＢ／ＢＡＴＲＫＤ（配列番号：２１／配列番号：１８），およびＢＡＴＲＨＣ／ＢＡＴＲＫＤ（配列番号：２２／配列番号：１８）からなる群から選択される可変領域を含む請求項４７に記載の方法。
請求項50
前記ヒト化モノクローナル抗体が、ＢＡＴＲＨＣ／ＢＡＴＲＫＤ（配列番号：２２／配列番号：１８）に対応する可変領域を有する請求項４９に記載の方法。
請求項51
前記ヒト化抗体の断片が、Ｆｖ，Ｆ（ａｂ’），Ｆ（ａｂ’）２および単鎖抗体からなる群から選択される請求項４７〜４９のいずれかに記載の方法。
請求項52
前記ヒト化抗体またはその断片が、ｍＢＡＴ−１の抗腫瘍活性を保持する請求項４７〜４９のいずれかに記載の方法。
請求項53
前記方法が、前記対象に少なくとも一つの化学療法剤を投与することを更に含む請求項４７に記載の方法。
請求項54
前記少なくとも一つの化学療法剤が、代謝拮抗剤、白金に基づく薬剤、有糸分裂阻害剤、アントラサイクリン系抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤、抗血管形成薬剤および、それらの組合せからなる群から選択される請求項５３に記載の方法。
請求項55
前記少なくとも一つの化学療法剤が、５‐フルオロウラシル、ウラシルマスタード、ウラシル、カペシタビン、６‐メルカプトプリン、メトトレキセート、ゲムシタビン、シタラビン、フルダラビンおよびペメトレキセドからなる群から選択される代謝拮抗剤；シスプラチン、カルボプラチンおよびオキサリプラチンからなる群から選択される白金に基づく薬剤；パクリタキセル、ドセタキセル、エトポシド、ビンブラスチン、ビンクリスチンおよびビノレルビンからなる群から選択される有糸分裂阻害剤；ベバシズマブ、ドーパミンおよびテトラチオモリブデート、ＶＥＧＦの抗血管形成異型からなる群から選択される抗血管形成薬剤；ならびにそれらの組合せからなる群から選択される請求項５４に記載の方法。
請求項56
前記少なくとも一つの化学療法剤が、５−フルオロウラシル、シタラビン、オキサリプラチン、パクリタキセルおよび、それらの組合せからなる群から選択される請求項５５に記載の方法。
請求項57
前記少なくとも一つの化学療法剤が、トポイソメラーゼＩ阻害剤およびアルキル化剤からなる群から選択される薬剤以外である請求項５３に記載の方法。
請求項58
前記ヒト化抗体および前記少なくとも一つの化学療法剤の投与を、実質的に同時、並行、交替、順次または連続して実行する請求項５３に記載の方法。
請求項59
前記ヒト化抗体および前記少なくとも一つの化学療法剤を、重複計画に従って投与する請求項５３に記載の方法。
請求項60
前記ヒト化抗体の投与を前記少なくとも一つの化学療法剤の最初の投与の前に実行する請求項５３に記載の方法。
請求項61
請求項５３に記載の方法が、放射線で前記対象を処理することを更に含む方法。
請求項62
前記腫瘍が、結腸直腸癌腫；肺癌腫；乳癌；黒色腫；卵巣悪性腫瘍；子宮頚癌、膵臓癌；多発性骨髄腫；腎細胞癌；非ホジキンリンパ腫；ホジキン病；マントル急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）；慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）；急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）および慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）からなる群から選択される請求項４７に記載の方法。
請求項63
（ｉ）免疫グロブリンまたはその修飾物から、マウスのモノクローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）およびフレームワーク領域（ＦＲ）の少なくとも一つの相補性決定領域を有するヒト化モノクローナル抗体またはその断片と；（ｉｉ）少なくとも一つの化学療法剤とを、腫瘍を処理するための薬物の製造するための使用。
請求項64
ヒト化モノクローナル抗体またはその断片であって、前記抗体またはその断片が受容体ヒト免疫グロブリンまたはその修飾物から、マウスのモノクローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）およびフレームワーク領域（ＦＲ）の少なくとも一つの相補性決定領域を有し；少なくとも一つの化学療法剤で化学療法を受ける対象の腫瘍の治療のためのヒト化モノクローナル抗体またはその断片。
請求項65
ヒト化モノクローナル抗体またはその断片の使用であって、前記抗体またはその断片が受容体ヒト免疫グロブリンまたはその修飾物から、マウスのモノクローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）およびフレームワーク領域（ＦＲ）の少なくとも一つの相補性決定領域を有し、前記少なくとも一つの化学療法剤による化学療法を受ける対象において、少なくとも一つの化学療法剤に対する許容性を改善する薬物を製造するための使用。
請求項66
ヒト化モノクローナル抗体またはその断片であって、前記抗体またはその断片が受容体ヒト免疫グロブリンまたはその修飾物から、マウスのモノクローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）およびフレームワーク領域（ＦＲ）の少なくとも一つの相補性決定領域を有し、前記少なくとも一つの化学療法剤による化学療法を受ける対象の少なくとも一つの化学療法剤に対する許容性を改善するためのヒト化モノクローナル抗体またはその断片。
請求項67
ヒト化モノクローナル抗体またはその断片の使用であって、前記抗体またはその断片が受容体ヒト免疫グロブリンまたはその修飾物から、マウスのモノクローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）およびフレームワーク領域（ＦＲ）の少なくとも一つの相補性決定領域を有し、腫瘍を有する対象の生存性を向上させる薬物の製造に関し、前記対象を、少なくとも一つの化学療法剤で処理を行うヒト化モノクローナル抗体またはその断片の使用。
請求項68
ヒト化モノクローナル抗体またはその断片であって、前記抗体またはその断片が受容体ヒト免疫グロブリンまたはその修飾物から、マウスのモノクローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）およびフレームワーク領域（ＦＲ）の少なくとも一つの相補性決定領域を有し；腫瘍を有する対象の生存性を向上させるために、前記対象は、少なくとも一つの化学療法剤によって処理されてなるヒト化モノクローナル抗体またはその断片。
請求項69
ヒト化モノクローナル抗体またはその断片の使用であって、前記抗体またはその断片が受容体ヒト免疫グロブリンその修飾物から、マウスのモノクローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）およびフレームワーク領域（ＦＲ）の少なくとも一つの相補性決定領域を有し；腫瘍再発を減少または予防する薬物を製造するための使用。
請求項70
請求項６９に記載の使用は、前記腫瘍が化学療法を受けた対象にあり、少なくとも一つの化学療法薬による化学療法を受けているものに使用。
請求項71
ヒト化モノクローナル抗体またはその断片であって、前記抗体またはその断片が受容体ヒト免疫グロブリンまたはその修飾物から、マウスのモノクローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）およびフレームワーク領域（ＦＲ）の少なくとも一つの相補性決定領域を有し；腫瘍再発を減少または予防するためのヒト化モノクローナル抗体またはその断片。